@phdthesis{Smul2005, author = {Smul, Thorsten}, title = {Lokalisation von hochaffinen Glutamattransportern in verschiedenen ZNS-Regionen der Maus}, url = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-13971}, school = {Universit{\"a}t W{\"u}rzburg}, year = {2005}, abstract = {Um das Transmittersignal von Glutamat zu beenden und eine neurotoxische Anreicherung zu verhindern, muss Glutamat aus dem Extrazellularraum des ZNS entfernt werden. Daf{\"u}r sind die hochaffinen Glutamattransporter in Gliazellen und Neuronen zust{\"a}ndig, die Glutamat aus dem Extrazellularraum aufnehmen. In der vorliegenden Arbeit wurde die regionale und zellul{\"a}re Verteilung der Glutamattransporter GLT1, GLAST und EAAC1 in Hippocampus, Kleinhirn und R{\"u}ckenmark von Maus und Ratte untersucht. Als Nachweismethoden wurden Western Blot-Analysen und immunhistochemische Nachweise an fixierten Kryostatschnitten und Semid{\"u}nnschnitten von gefriergetrockneten Geweben eingesetzt.}, language = {de} } @phdthesis{KaratasWulf2007, author = {Karatas-Wulf, Emine Ufuk}, title = {Proteinkinase C (PKC) vermittelte Oberfl{\"a}chenexpression von Glutamattransportern in kultivierten zerebell{\"a}ren K{\"o}rnerzellen der Maus}, url = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-23993}, school = {Universit{\"a}t W{\"u}rzburg}, year = {2007}, abstract = {Der Glutamattransporter GLT1v, eine Spleißvariante von GLT1, kommt haupts{\"a}chlich im Zytoplasma von Neuronen vor. Es wurde gezeigt, dass GLT1v ein putatives PDZDom{\"a}nen- Bindungsmotiv am C-Terminus enth{\"a}lt und mit PICK1, ein mit PKC interagierendes Protein, interagiert. Es ist daher denkbar, dass durch Interaktion zwischen GLT1v und PICK1 die GLT1v-Translokation {\"u}ber eine PKC-abh{\"a}ngigen Phosphorylierung reguliert wird. In der vorliegenden Untersuchung wurden kultivierte zerebell{\"a}re K{\"o}rnerzellen aus der Maus benutzt, um mittels Immunzytochemie und Biotinilierung/Westernblot zu zeigen, ob eine GLT1v-Translokation {\"u}ber einen PKC-abh{\"a}ngigen Signalweg reguliert wird und sollte dies der Fall sein, ob diese Regulation vom elektrophysiologischen Status der zerebell{\"a}ren K{\"o}rnerzellen abh{\"a}ngt. Vergleichstudien wurden mit EAAC1 durchgef{\"u}hrt. Die K{\"o}rnerzellen wurden in einem Medium mit 27 mM KCl (chronisch depolarisierte K{\"o}rnerzellen) und mit 5 mM KCl (ruhende K{\"o}rnerzellen) kultiviert. Eine 30 min{\"u}tige PKC-Aktivierung durch Phorbol-Myristat-Acetat (PMA) ergab in ruhenden K{\"o}rnerzellen eine 41 \% bzw. 31 \% (signifikante) Zunahme in der Zelloberfl{\"a}chenexposition von GLT1v bzw. EAAC1 im Vergleich zur Kontrolle. Vergleicht man K{\"o}rnerzellen nach PMA- mit solchen nach 30 min{\"u}tiger Staurosporinbehandlung (PKC-Inhibitor), so betr{\"a}gt die Oberfl{\"a}chenzunahme nach der PMA-Behandlung bei GLT1v bzw. EAAC1 115\% bzw. 69\%. Zerebell{\"a}re K{\"o}rnerzellen, die mit 27 mM KCl kultiviert wurden (chronische Depolarisation), ergaben demgegen{\"u}ber keine signifikanten {\"A}nderungen in der Oberfl{\"a}chenexpression von GLT1v und EAAC1, beim Vergleich der verschiedenen experimentellen Bedingungen (PMA, Staurosporin). Die immunzytochemischen Untersuchungen ergaben, dass bei ruhenden K{\"o}rnerzellen (5mM KCl) nach PKC-Aktivierung mittels PMA zahlreiche, große Varikosit{\"a}ten (pr{\"a}synaptische Elemente der Neuriten) auftreten, die eine intensive Immunreaktivit{\"a}t f{\"u}r GLT1v und EAAC1 zeigen. Wir konnten auch nachweisen, dass beide Transporter in getrennten Vesikelpopulationen vorkommen. Die Immunelektronenmikroskopie am Kleinhirn der adulten Maus hat ergeben, dass GLT1v und EAAC1 in Varikosit{\"a}ten der Parallelfasern von K{\"o}rnerzellen lokalisiert sind. Dieses in situ Ergebnis stimmt somit mit den kultivierten K{\"o}rnerzellen {\"u}berein. Insgesamt lassen die Untersuchungen den Schluss zu, dass die Oberfl{\"a}chenexpression von GLT1v und EAAC1 (1) {\"a}hnlich reguliert zu werden scheint, (2) in Varikosit{\"a}ten von glutamatergen K{\"o}rnerzellen stattfindet, aus denen Glutamat freigesetzt wird, und (3) vom elektrophysiologischen Status der zerebell{\"a}ren K{\"o}rnerzellen abh{\"a}ngt.}, subject = {GLT1v}, language = {de} }