@phdthesis{Attinger2010,
  author    = {Attinger, Hannah Marie},
  title     = {Bedeutung der nukle{\"a}ren Lokalisationssequenz (NLS) des Proteins p8 f{\"u}r die Kerntranslokation und seine Proliferation induzierende Wirkung},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-47534},
  school      = {Universit{\"a}t W{\"u}rzburg},
  year      = {2010},
  abstract  = {p8 ist ein erstmals im Zusammenhang mit akuter Pankreatitis beschriebenes Protein, das im exokrinen und endokrinen Pankreas mit vermehrtem Zellwachstum assoziiert ist. Bei der Analyse seiner Prim{\"a}rstruktur wurde ein spezies{\"u}bergreifend hoch konservierter Abschnitt, eine sogenannte NLS, ausgemacht, der HMG-Y/I-Proteinen {\"a}hnelt. Da HMG-Proteine oft als Transkriptionsfaktoren wirken, wurde die Hypothese formuliert, auch p8 sei ein HMG-Y/I-Protein und wirke als Transkriptionsfaktor im Nukleus. Um die Bedeutung der rp8-NLS n{\"a}her zu charakterisieren, wurde in INS-1 beta-Zellen ein rp8(NLS-)-EGFP Fusionsprotein ektopisch exprimiert, um dessen subzellul{\"a}re Lokalisation zu untersuchen. Es zeigte sich, {\"a}hnlich wie bei Kontrollzellen mit ektoper Expression von EGFP allein, eine gleichm{\"a}ßige Verteilung von rp8(NLS-)-EGFP zwischen Zytoplasma und Nukleus. Da rp8(NLS-) trotz fehlender NLS dennoch in den Kern translozieren kann, scheint die NLS f{\"u}r diesen Vorgang nicht essentiell zu sein. Diese Annahme wird gest{\"u}tzt durch die Beobachtung, dass einzeln exprimiertes rp8(NLS-) seine Proliferation induzierende Wirkung nicht verliert. In Zellz{\"a}hlungsexperimenten zeigte sich, dass ein rp8- bzw. p8(NLS-)-EGFP Fusionsprotein keinen proliferationsf{\"o}rdernden Einfluss in INS-1 und hMSC-TERT Zellen hat. Bei ektoper Expression von rp8 bzw. rp8(NLS-) und hrGFP als Einzelproteine konnte jedoch eine zwischen beiden rp8-Varianten {\"a}hnliche und insgesamt signifikante Stimulation der Zellvermehrung beobachtet werden. Dies belegt, dass die Fusion von rp8 an EGFP dessen biologische Funktion inhibiert, w{\"a}hrend die Deletion der NLS keinen Einfluß darauf hat. Da der proliferative Stimulus von p8 in menschlichen hMSC-TERT Zellen unabh{\"a}ngig von der Herkunft von p8 aus Ratte oder Mensch ist, scheint p8 bei S{\"a}ugern hoch konserviert zu sein und spezies{\"u}bergreifend zu wirken. Aus der hier vorgestellten Arbeit geht hervor, dass der molekulare Mechanismus, {\"u}ber den p8 glukoseabh{\"a}ngig proliferationsinduzierend in INS-1 beta-Zellen wirkt, nicht {\"u}ber die NLS vermittelt wird. Weitere Untersuchungen der Wirkungsweise von p8 auf molekularer Ebene k{\"o}nnten in Zukunft einen Ansatz zur in vitro-Generierung ausreichender Mengen an beta-Zellen zur Zelltherapie des Diabetes mellitus bilden.},
  subject      = {Diabetes mellitus},
  language  = {de}
}
@phdthesis{Gehlen2005,
  author    = {Gehlen, Martin Ludwig},
  title     = {Kontrollierte Expansion von Insulin produzierenden Beta-Zellen des endokrinen Pankreas durch das Protein p8},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-12027},
  school      = {Universit{\"a}t W{\"u}rzburg},
  year      = {2005},
  abstract  = {p8 ist ein vor einigen Jahren erstmals im Zusammenhang mit Pankreatitis beschriebenes 80 Aminos{\"a}uren langes Protein, das im exokrinen Pankreas mit vermehrtem Zellwachstum assoziiert ist. Wir konnten p8 auch in beta-Zellen des endokrinen Pankreas nachweisen. Um Informationen {\"u}ber die subzellul{\"a}re Lokalisation zu erhalten, wurde ein Plasmid, das f{\"u}r ein Fusionsprotein aus p8 und GFP (gr{\"u}n fluoreszierendes Protein) kodiert, kloniert und in verschiedene Ziellinien transfiziert. Die Ergebnisse dieser Versuche sprechen daf{\"u}r, dass p8 ein nukle{\"a}res Protein ist. Durch ein Deletionskonstrukt des Fusionsproteins wurde ein nukle{\"a}res Lokalisationssignal (NLS) am C-terminalen Ende des Proteins identifiziert. Um weitere Informationen {\"u}ber Funktion und Wirkungsweise von p8 zu erhalten, wurden induzierbar stabile INS-1-Zellen (beta-Zelllinie) etabliert. Stimulation dieser Zellen mit IPTG f{\"u}hrte zu einer 5fachen {\"U}berexpression von p8. Die Zellzahl der p8-{\"u}berexprimierenden Zellen und die der nicht-p8-{\"u}berexprimierenden Zellen wurde zeitabh{\"a}ngig verglichen. Je nach Versuchsaufbau wurden nach 96 Stunden Zellwachstum unter p8-{\"U}berexpression 31\% bis 37\% mehr Zellen als in dem Vergleichskollektiv ohne p8-{\"U}berexpression ermittelt. Von Seufert et al. wurden in den Zellmedien der p8 {\"u}berexprimierenden stabilen INS-1-Zellen kumulativ erh{\"o}hte Insulin-Spiegel gemessen. Dieses spricht daf{\"u}r, dass {\"U}berexpression von p8 in beta-Zellen Proliferation ausloest, nicht aber zu einem Differenzierungsverlust f{\"u}hrt. Unsere Untersuchungen n{\"a}hren die Hoffnung, dass in Zukunft mit Hilfe von p8 Spender-beta-Zellen in vitro vermehrt und im Rahmen einer Zelltherapie einem Diabetiker transplantiert werden k{\"o}nnten.},
  language  = {de}
}