@phdthesis{Abt2006,
  author    = {Abt, Marion},
  title     = {Interaktion von Masernviren mit Dendritischen Zellen : Untersuchungen zur Rezeptorbenutzung, Regulation der Chemotaxis und T-Zellkommunikation},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-19706},
  school      = {Universit{\"a}t W{\"u}rzburg},
  year      = {2006},
  abstract  = {Im Rahmen der vorliegenden Arbeit wurde der Einfluss von MV auf die Expression und Nutzung verschiedener Rezeptoren auf Dendritischen Zellen (DC) untersucht. Dazu wurden DC in vitro aus Monozyten gewonnen und mit IL- 4 und GM-CSF ausdifferenziert. In der Arbeit wurden das Wildtypvirus WTF und der Vakzinestamm ED eingesetzt. Im ersten Teil der Arbeit wurde die Expression der Chemokinrezeptoren 5 (CCR5) und 7 (CCR7) auf MV-infizierten DC-Kulturen sowie das Migrationsverhalten der DC untersucht. Die Expression von CCR5 ist abh{\"a}ngig vom Reifungszustand der DC. W{\"a}hrend unreife DC CCR5 exprimieren, verringert sich die Expression im Zuge der Ausreifung, w{\"a}hrend die Expression von CCR7 induziert wird. In der vorliegenden Arbeit konnte gezeigt werden, dass die MV-Infektion einer DC-Kultur die Expression von CCR5 nicht beeinflusst, obwohl die Expression anderer charakteristischer Reifungsmarker erh{\"o}ht wird. Weiterhin konnte die Expression von CCR7 durch eine Infektion der DC-Kulturen mit MV nicht induziert werden. Die Ergebnisse der durchgef{\"u}hrten durchflusszytometrischen Analysen zur Rezeptorexpression wurden in Chemotaxis-Assays eingehender untersucht. DC aus MV-infizierten Kulturen zeigten trotz anhaltender CCR5-Expression nur eine geringe Migration in Richtung des CCR5-Liganden CCL-3. Aufgrund der fehlenden CCR7- Expression konnte erwartungsgem{\"a}ß keine Migration der eingesetzten DC gegen{\"u}ber dem CCR7-Liganden CCL-19 beobachtet werden. Weiterhin konnten Unterschiede im induzierten Chemokinmuster in MV-infizierten DCKulturen im Vergleich zu LPS-ausgereiften oder mit einer Mockpr{\"a}paration behandelten DC nachgewiesen werden. Kurz nach der Infektion konnte in MVinfizierten DC-Kulturen eine reduzierte Menge CXCL-8 und CCL-20 sowohl auf mRNA Ebene als auch auf Proteinebene detektiert werden. In weiteren Experimenten konnte eine verminderte Migration von T-Zellen auf Zusammenfassung 152 Zellkultur{\"u}berst{\"a}nde aus infizierten DC-Kulturen im Vergleich zu {\"U}berst{\"a}nden aus LPS-behandelten DC-Kulturen festgestellt werden. Im zweiten Teil der vorgelegten Arbeit konnte MV als Ligand f{\"u}r das DCspezifische Oberfl{\"a}chenmolek{\"u}l DC-SIGN (dendritic cell-specific intercellular adhesion molecule (ICAM)-3 grabbing non-integrin) identifiziert werden. Dabei konnte gezeigt werden, dass beide verwendeten Virusst{\"a}mme an DC-SIGN binden k{\"o}nnen, DC-SIGN jedoch keinen Eintrittsrezeptor f{\"u}r MV darstellt. Weitere Analysen zeigten, dass DC-SIGN die Infektion, besonders bei geringen Viruskonzentrationen, verst{\"a}rkt. In erster Linie zeigt die MV-Infektion unreifer DC die Bedeutung von DC-SIGN als Bindungsrezeptor f{\"u}r MV. Die hohe Expression von DC-SIGN auf unreifen DC erm{\"o}glicht eine effiziente effektive Infektion dieser Zellen. Auf reifen DC ist der Einfluss von DC-SIGN auf die Effektivit{\"a}t der Infektion der DC deutlich verringert. Im dritten Teil dieser Arbeit wurden die Kontaktzeiten zwischen DC und TZellen in dreidimensionalen Kollagenmatrices untersucht. Dabei wurde eine in etwa doppelt so lange Kontaktzeit zwischen MV-infizierten DC und durch Oxidative Mitogenese ver{\"a}nderten T-Zellen gegen{\"u}ber LPS-behandelten DC bzw. MV-infizierten und nicht-modifizierten T-Zellen festgestellt. In den parallel durchgef{\"u}hrten Proliferationstests wurde eine reduzierte Proliferation der TZellen beobachtet, die mit MV-infizierten DC kokultiviert wurden. Im Gegensatz zu den k{\"u}rzeren Kontakten zwischen LPS-behandelten DC und modifizierten TZellen waren die Kontakte zwischen MV-infizierten DC und modifizierten TZellen nicht-stimulatorisch.},
  subject      = {Dendritische Zelle},
  language  = {de}
}
@phdthesis{Adenugba2021,
  author    = {Adenugba, Akinbami Raphael},
  title     = {Functional analysis of the gene organization of the pneumoviral attachment protein G},
  doi       = {10.25972/OPUS-12814},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-128146},
  school      = {Universit{\"a}t W{\"u}rzburg},
  year      = {2021},
  abstract  = {The putative attachment protein G of pneumonia virus of mice (PVM), a member of the Pneumoviruses, is an important virulence factor with so far ambiguous function in a virus-cell as well as in virus-host context. The sequence of the corresponding G gene is characterized by significant heterogeneity between and even within strains, affecting the gene and possibly the protein structure. This accounts in particular for the PVM strain J3666 for which two differing G gene organizations have been described: a polymorphism in nucleotide 65 of the G gene results in the presence of an upstream open reading frame (uORF) that precedes the main ORF in frame (GJ366665A) or extension of the major G ORF for 18 codons (GJ366665U). Therefore, this study was designed to analyse the impact of the sequence variations in the respective G genes of PVM strains J3666 and the reference strain 15 on protein expression, replication and virulence. First, the controversy regarding the consensus sequence of PVM J3666 was resolved. The analysis of 45 distinct cloned fragments showed that the strain separated into two distinct virus populations defined by the sequence and structure of the G gene. This division was further supported by nucleotide polymorphisms in the neighbouring M and SH genes. Sequential passage of this mixed strain in the cell line standardly used for propagation of virus stocks resulted in selection for the GJ366665A-containing population in one of two experiments pointing towards a moderate replicative advantage. The replacement of the G gene of the recombinant PVM 15 with GJ366665A or GJ366665U, respectively, using a reverse genetic approach indicated that the presence of uORF within the GJ366665A significantly reduced the expression of the main G ORF on translational level while the potential extension of the ORF in GJ366665U increased G protein expression. In comparison, the effect of the G gene-structure on virus replication was inconsistent and dependent on cell line and type. While the presence of uORF correlated with a replication advantage in the standardly used BHK-21 cells and primary murine embryonic fibroblasts, replication in the murine macrophage cell line RAW 264.7 did not. In comparison, the GJ366665U variant was not associated with any effect on replication in cultured cells at all. Nonetheless, in-vivo analysis of the recombinant viruses associated the GJ366665U gene variant, and hence an increased G expression, with higher virulence whereas the GJ366665A gene, and therefore an impaired G expression, conferred an attenuated phenotype to the virus. To extend the study to other G gene organizations, a recombinant PVM expressing a G protein without the cytoplasmic domain and for comparison a G-deletion mutant, both known to be attenuated in vivo, were studied. Not noticed before, this structure of the G gene was associated with a 75\% reduction in G protein expression and a significant attenuation of replication in macrophage-like cells. This attenuation was even more prominent for the virus lacking G. Taking into consideration the higher reduction in G protein levels compared to the GJ366665A variant indicates that a threshold amount of G is required for efficient replication in these cells. In conclusion, the results gathered indicated that the expression levels of the G protein were modulated by the sequence of the 5' untranslated region of the gene. At the same time the G protein levels modulated the virulence of PVM.},
  subject      = {G glycoprotein},
  language  = {en}
}
@article{AguzziBothAnhauseretal.1992,
  author    = {Aguzzi, A. and Both, K. and Anhauser, I. and Horak, I. and Rethwilm, Axel and Wagner, EF.},
  title     = {Expression of human foamy virus is differentially regulated during development in transgenic mice},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-55290},
  year      = {1992},
  abstract  = {Tbe human foamy virus (HFV) is a recently characterized member ofthe spumavirus family. Although no diseases have been unequivocally associated with HFV infection, expression of HFV regulatory genes in transgenie mice induces a characteristic aeute neuro degenerative disease and a myopathy. To better eharaeterize the sequenee of events leading to disease, and to gain a better understanding of the underlying pathogenetic meehanisms, we have analyzed in detail the transgene expression pattern during development. Transcription of a construet containing all regulatory elements and aneillary genes of mv was analyzed by in situ hybridization and was shown to occur in two distinct phases. At midgestation, low but widespread expression was first deteeted in eells of extraembryonie tissues. Later, various tissues originating from embryonie mesoderm, neuroeetoderm, and neural erest transeribed the transgene at moderate levels. However, expression deereased dramatically during late gestation and was suppressed shortly after birth. After a latency period of up to 5 weeks, transeription of the transgene resumed in single eelJs distributed irregularly in the central nervous system and in the skeletal museIe. By the age of 8 weeks, an increasing number of eells displayed much higher expression levels than in embryonie Iife and eventually underwent severe degenerative ehanges. These findings demonstrate that HFV transgene expression is differentially regulated in development and that HFV cytotoxicity may be dose-dependent. Such biphasic pattern of expression differs from that of murine retroviruses and may be explained by the specificity of HFV regulatory elements in combination with cellular faetors. Future studies of this model system should, therefore, provide novel insights in the mechanisms controlling retrovirallatency.},
  subject      = {Virologie},
  language  = {en}
}
@article{AguzziWagnerNetzeretal.1993,
  author    = {Aguzzi, A. and Wagner, E. F. and Netzer, K. O. and Bothe, K. and Anhauser, I. and Rethwilm, Axel},
  title     = {Human foamy virus proteins accumulate in neurons and induce multinucleated giant cells in the brain of transgenic mice},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-47356},
  year      = {1993},
  abstract  = {Humanfoamy virus (HFV) is a retrovirus encoding structural genes and, like human immunodeficiency virus and human T ceU leukemia virus I, several anciUary reading frames collectively termed the belgenes. We have previously shown that HFV transgenic mice develop an encephalopathy with neuronal loss in hippocampus and cerebral cortex. We have now raised and characterized rabbit antisera to various recombinant portions of gag, pot, env, and bel-I, the viraltransactivator. Immunoreactivity for gag and bel-I was observed in nuclei and processes of hippocampal and cortical neurons before the onset of morphological lesions and correlated with the appearance of HFV mRNA. Astrocyte-derived multinucleated giant ceUs containing HFV proteins were present in the brain oftransgenic mice coexpressingfuU- length HFV genes but not in mice expressing truncated gag and env, suggesting that these genes contain afusogenic domain. Expression of fuU-length structural genes decreased the life expectancy oftransgenic mice, implying an a4Juvant rolefor these proteins in HFV-induced brain damage. (Am] Pathol 1993, 142:1061-1072)},
  subject      = {Molekularpathologie},
  language  = {en}
}
@article{AintablianStrozniakHeueretal.2023,
  author    = {Aintablian, Arpa and Strozniak, Sandra and Heuer, Marion and Lutz, Manfred B.},
  title     = {M-MDSC in vitro generation from mouse bone marrow with IL-3 reveals high expression and functional activity of arginase 1},
  series = {Frontiers in Immunology},
  volume    = {14},
  journal   = {Frontiers in Immunology},
  doi       = {10.3389/fimmu.2023.1130600},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-317769},
  year      = {2023},
  abstract  = {Myeloid-derived suppressor cells (MDSC) represent major regulators of immune responses, which can control T cells via their inducible nitric oxide synthase (iNOS)- and arginase 1 (Arg1)-mediated effector functions. While GM-CSF is well documented to promote MDSC development, little is known about this potential of IL-3, an established growth factor for mast cells. Here, we show that IL-3, similar to GM-CSF, generates monocytic MDSC (M-MDSC) from murine bone marrow (BM) cells after 3 days of in vitro culture. At this time point, predominantly CD11b+ CD49a+ monocytic and CD11b+ CD49a- FcεR I- neutrophilic cells were detectable, while CD11blow/neg FcεR I+ mast cells accumulated only after extended culture periods. Both growth factors were equivalent in generating M-MDSC with respect to phenotype, cell yield and typical surface markers. However, IL-3 generated M-MDSC produced less TNF, IL-1β and IL-10 after activation with LPS + IFN-γ but showed higher Arg1 expression compared to GM-CSF generated M-MDSC. Arg1 was further induced together with iNOS after MDSC activation. Accordingly, an increased Arg1-dependent suppressor activity by the IL-3 generated M-MDSC was observed using respective iNOS and Arg1 inhibitors. Together, these data indicate that M-MDSC can be generated in vitro by IL-3, similar to GM-CSF, but with increased Arg1 expression and Arg1-mediated suppression capacity. This protocol now allows further in vitro studies on the role of IL-3 for MDSC biology.},
  language  = {en}
}
@phdthesis{Andres2006,
  author    = {Andres, Oliver},
  title     = {Interaktion von Masernviren mit vaskul{\"a}ren Endothelzellen},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-25650},
  school      = {Universit{\"a}t W{\"u}rzburg},
  year      = {2006},
  abstract  = {Obwohl eine wirksame Schutzimpfung verf{\"u}gbar ist, sind Masern noch immer weltweit verbreitet. Mit etwa 750.000 Todesf{\"a}llen j{\"a}hrlich geh{\"o}ren sie zu den gef{\"a}hrlichsten Infektionskrankheiten im Kindesalter {\"u}berhaupt. Nicht allein wegen der masernvirusinduzierten Immunsuppression treten sekund{\"a}re bakterielle Infektionen, darunter Otitiden oder Pneumonien, geh{\"a}uft auf. Eine Beteiligung des zentralen Nervensystems kann zur akuten postinfekti{\"o}sen Masernenzephalitis (APME), die meist mit einer hohen Defektheilungsrate einhergeht, oder zur letal verlaufenden subakuten sklerosierenden Panenzephalitis (SSPE) f{\"u}hren. Besonders gef{\"u}rchtet sind die schweren Komplikationen der Riesenzellpneumonie oder der measles inclusion body encephalitis (MIBE) bei immunsupprimierten Patienten. Viele pathogenetische Aspekte und pathophysiologische Vorg{\"a}nge sind dabei noch nicht g{\"a}nzlich verstanden. Vaskul{\"a}re Endothelzellen sind neben Epithelzellen, Monozyten und Makrophagen sowie Lymphozyten als wichtige Zielzellen f{\"u}r das Masernvirus bei der Ausbreitung der Masernvirusinfektion und Entstehung ihrer Komplikationen anzusehen. In immunhistochemisch aufbereiteten pathologischen Schnittpr{\"a}paraten wurden in infizierten und stark entz{\"u}ndlich ver{\"a}nderten Arealen immer wieder infizierte Gef{\"a}ßendothelzellen gefunden. Eine systematische Untersuchung der Interaktion von Masernviren mit humanen Gef{\"a}ßendothelzellen in vitro lag allerdings bislang nicht vor. Das Ziel dieser Dissertation war es nun, die Interaktion von attenuierten und virulenten Masernvirusst{\"a}mmen mit humanen Gef{\"a}ßendothelzellen grundlegend und systematisch zu untersuchen und eine Basis f{\"u}r die Definition pathogenetisch bedeutsamer molekularer Mechanismen zu schaffen. Hierf{\"u}r wurde mit prim{\"a}ren Endothelzellen der menschlichen Nabelschnurvene (HUVEC) und einer humanen mikrovaskul{\"a}ren Hirnendothelzelllinie (HBMEC) ein rein humanes Zellkulturmodell gew{\"a}hlt und unter Verwendung attenuierter und virulenter Masernvirusst{\"a}mme den nat{\"u}rlichen Bedingungen Rechnung getragen. Als essentielle Grundlage f{\"u}r die Untersuchungsreihen wurden die Endothelzellen auf endothelzellspezifische Markermolek{\"u}le hin untersucht und charakterisiert. Einzig die Oberfl{\"a}chenproteine membrane cofactor protein (MCP oder CD46) und signaling lymphocytic activation molecule (SLAM oder CD150) sind bislang als zellul{\"a}re Rezeptoren f{\"u}r das Masernvirus identifiziert worden. Es konnte hier eindeutig nachgewiesen werden, dass HUVEC und HBMEC auf verschiedenen zellul{\"a}ren Ebenen konstitutiv CD46, nicht aber SLAM exprimieren. Weder eine Aktivierung der Endothelzellen mit diversen Zytokinen und Stimulantien, noch der Kontakt der Endothelzellen mit inaktivierten Masernviren vermochte eine Expression von SLAM zu induzieren, obwohl eine Expression von toll-like receptor 2 (TLR2) klar aufgezeigt werden konnte. Es konnte hier ebenfalls belegt werden, dass sowohl der attenuierte Masernvirusstamm Edmonston (Edm) als auch die virulenten Masernvirusst{\"a}mme WTFb, W{\"u}4797 und W{\"u}5679 Endothelzellen infizieren und eine morphologische Zellalteration mit Ausbildung eines zytopathischen Effekts hervorrufen k{\"o}nnen. Weitere Analysen zeigten f{\"u}r Edm und W{\"u}4797 ein enormes Infektionsausmaß und eine sehr gute Ausbreitungseffizienz, die durch die Anwesenheit CD46-spezifischer Antik{\"o}rper nur bei Edm klar reduziert werden konnte. Eine Aktivierung der Endothelzellen mit diversen Zytokinen und Stimulantien trug keinen eindeutigen beg{\"u}nstigenden oder hemmenden Effekt auf die Masernvirusinfektion mit sich, Interferon-\&\#945; und -\&\#947; schienen das Infektionsausmaß abzuschw{\"a}chen. Folgeversuche zur Rezeptormodulation durch Masernviren deuten darauf hin, dass CD46 nur f{\"u}r den attenuierten Masernvirusstamm Edm, nicht aber f{\"u}r die virulenten Masernvirusst{\"a}mme WTFb, W{\"u}4797 und W{\"u}5679 als zellul{\"a}rer Rezeptor fungiert. Die Ergebnisse dieser Dissertation belegen eine von den beiden Masernvirusrezeptoren CD46 und SLAM unabh{\"a}ngige Infektion humaner vaskul{\"a}rer Endothelzellen mit Masernviruswildtypst{\"a}mmen. Diese Beobachtungen lassen einen weiteren, bislang noch nicht bekannten zellul{\"a}ren Rezeptor oder einen von einem zellul{\"a}ren Rezeptor unabh{\"a}ngigen Aufnahme- und Ausbreitungsmechanismus bei Gef{\"a}ßendothelzellen vermuten. Es darf weiterhin als sicher angesehen werden, dass Endothelzellen in der Pathogenese von masernvirusinduzierten Komplikationen, sei es direkt oder indirekt, involviert sind.},
  subject      = {Masern},
  language  = {de}
}
@article{ArchelosRoggenbuckSchneiderSchauliesetal.1993,
  author    = {Archelos, J. J. and Roggenbuck, K. and Schneider-Schaulies, J{\"u}rgen and Toyka, K. V. and Hartung, H. P.},
  title     = {Detection and quantification of antibodies to the extracellular domain of Po during experimental allergic neuritis},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-54896},
  year      = {1993},
  abstract  = {Quantification of the peripheral nerve myelin glycoprotein PO and antibodies to PO is difficult due to insolubility of PO in physiological solutions. We have overcome this problern by using the water-soluble recombinant form of the extracellular domain of PO (PO-ED) and describe newly developed assays which allow detection and quantitation of PO and antibodies to PO, in serum and cerebraspinal fluid (CSF). These sensitive and specific assays based on the ELISA technique were used to study humoral immune responses to PO during experimental autoimmune ("allergic") neuritis (EAN). In order to establish these tests, monoclonal antiborlies to different epitopes of rodent and human PO-ED were produced. A two-antibody sandwich-ELISA allowing quantitation of PO Oower detection Iimit of 0.5 ngjml or 30 fmoljml) and an antibody-capture ELISA (lower detection Iimit 1 ng specific antibody jml) to detect antiborlies to PO in serum and CSF were developed. EAN was induced in rats by active immunization with bovine myelin or the neuritogenic protein P2 or by adoptive transfer using P2 specific CD4 positive T cells. Serum and CSF were assayed for the presence of PO-ED and antibodies to PO-ED or P2. Antibodies to PO-ED were detected during active myelin-induced EAN, but not during P2-induced or adaptive transfer EAN. The anti-PO-ED antibodies in the CSF showed a correJation with disease activity. In contrast, in the same model antibodies to P2 persisted long after the disease ceased. No soluble PO-Iike fragments could be found in serum or CSF during any of the three types of EAN. We conclude that PO may be a B-eeil epitope in EAN. These findings warrant a screen for antibodies to PO-ED in human immune neuropathies.},
  subject      = {Immunologie},
  language  = {en}
}
@article{ArchelosRoggenbuckSchneiderSchauliesetal.1993,
  author    = {Archelos, JJ and Roggenbuck, K. and Schneider-Schaulies, J{\"u}rgen and Linington, C. and Toyka, KV and Hartung, H.-P.},
  title     = {Production and characterization of monoclonal antibodies to the extracellular domain of PO},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-54889},
  year      = {1993},
  abstract  = {Seven monoclonal antibodies were raised against the immunoglobulin-like extracellular domain of PO (POED), the major protein of peripheral nervous system myelin. Mice were immunized with purified recombinant rat PO-ED. After fusion, 7 clones (POI-P07) recognizing either recombinant, rat, mouse, or human PO-ED were selected by ELlS A and were characterized by Western blot, immunohistochemistry, and a competition assay. Antibodies belonged to the IgG or IgM class, and P04-P07, reacted with PO in fresh-frozen and paraffin-embedded sections of human or rat peripheral nerve, but not with myelin proteins of the central nervous system of either species. Epitope specificity of the antibodies was determined by a competition enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and a direct ELlS A using short synthetic peptides spanning the entire extracellular domain of PO. These assays showed that POl and P02 exhibiting the same reaction pattern in Western blot and immunohistochemistry reacted with different distant epitopes of PO. Furthermore, the monoclonal antibodies P05 and P06 recognized 2 different epitopes in close proximity within the neuritogenic extracellular sequence of PO. This panel of monoclonal antibodies, each binding to a different epitope of the extracellular domain of PO, will be useful for in vitro and in vivo studies designed to explore the role of PO during myelination and in demyelinating diseases of the peripheral nervous system.},
  subject      = {Immunologie},
  language  = {en}
}
@phdthesis{Armbruster2011,
  author    = {Armbruster, Nicole},
  title     = {Gentherapie der Rheumatoiden Arthritis mit foamyviralen Vektoren},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-65330},
  school      = {Universit{\"a}t W{\"u}rzburg},
  year      = {2011},
  abstract  = {Die rheumatoide Arthritis (RA) ist eine Autoimmunerkrankung, die durch anhaltende Gelenksentz{\"u}ndungen gekennzeichnet ist und mit einer fortschreitenden Degradierung des Knorpels und Knochen einhergeht. Ungef{\"a}hr 2 \% der erwachsenen Bev{\"o}lkerung weltweit sind betroffen und leiden unter erheblichen Gelenkschmerzen und Beeintr{\"a}chtigungen. Der intraartikul{\"a}re Transfer anti-entz{\"u}ndlicher Gene (z.B. des Interleukin-1 Rezeptorantagonisten - IL1RA) zeigte signifikante Bedeutung in pr{\"a}klinischen und Phase-I klinischen Studien der RA Therapie. Die meisten dieser Studien verwendeten MLV-basierte orthoretrovirale Vektoren f{\"u}r eine stabile Transgenexpression, tragen aber das Risiko der Insertionsmutagenese. Wir haben foamyvirale Vektoren (FVV) etabliert, welche von apathogenen Elternviren abgeleitet sind und sich durch ein breites Wirtsspektrum und ein vorteilhaftes Integrationsmuster ins zellul{\"a}re Genom auszeichnen. In dieser Arbeit wurden IL1RA exprimierende prototypische foamyvirale Vektoren (PFV) generiert, deren chondroprotektives Potential in vitro und in einem indirekten Gentransferansatz in Kniegelenken von Wistar und athymischen Nacktratten in vivo evaluiert wurde. PFV Vektoren mit der kodierenden Sequenz f{\"u}r den humanen IL1RA, einer internen ribosomalen Eintrittsstelle (IRES) und EGFP wurden generiert und mit Verwendung eines Vier-Plasmidsystem, bestehend aus dem Vektorplasmid (IL1RA-IRES-EGFP) und den Expressionsplasmiden FV-gag, FV-pol und FV-env in 293T Zellen produziert. Ebenso wurden Kontrollvektoren welche nur EGFP exprimieren generiert. Transduktionsexperimente wurden mit prim{\"a}ren humanen mesenchymalen Stammzellen (MSZ) aus Knochenmarkaspiraten, der Tert-4 mesenchymalen Stammzelllinie, HT1080 Fibroblasten und prim{\"a}ren Ratten Synovialfibroblasten durchgef{\"u}hrt. Die Transgenexpression wurde mittels Fluoreszenzmikroskopie (EGFP), ELISA (IL1RA) und quantitativer Real-Time PCR (IL1RA) evaluiert. Die Funktionalit{\"a}t des IL1RA-Proteins wurde mit einem Prostaglandin E2 (PGE2) Assay gezeigt. Dazu wurden FV.IL1RA transduzierte Tert-4 Zellen und unbehandelte Zellen mit 10 ng/ml IL1 inkubiert. Als readout f{\"u}r die IL1-Stimulation dienten die PGE2 Mengen in den konditionierten Medien. Die Zellkultur{\"u}berst{\"a}nde wurden 48 h nach IL1-Gabe auf ihren PGE2 und IL1RA Gehalt hin untersucht. Die PGE2 Menge war dabei, im Vergleich zu den unbehandelten Kontrollen, in den FV.IL1RA transduzierten Zellen signifikant erniedrigt. Nach der Transplantation von foamyviral transduzierten Synovialfibroblasten in Kniegelenke von Wistar und athymischen Nacktratten, war die intraartikul{\"a}re (i.a.) Transgenexpression in den Wistar Ratten zun{\"a}chst hoch, fiel jedoch nach ungef{\"a}hr 3 Wochen ab. Im Gegensatz dazu war die foamyviral vermittelte IL1RA-Expression in den immundefizienten Ratten f{\"u}r 12 Wochen auf sehr hohen Leveln stabil. Ein Maximum wurde an Tag 10 nach i.a. Transplantation mit ca. 450 ng pro Gelenk erreicht. Untersuchungen zur Biodistribution zeigten keine extraartikul{\"a}re Transgenexpression in allen untersuchten Organen (Gehirn, Herz, Lunge, Leber, Niere, Milz, Gonaden und Serum). Diese Resultate, zusammen mit dem Ausbleiben von sekund{\"a}ren Erkrankungen, wie bspw. Tumoren, in allen behandelten Tieren, sprechen f{\"u}r die Sicherheit des Ansatzes. Die Arbeit zeigt, dass FVV verwendet werden k{\"o}nnen, um prim{\"a}re Synovialfibroblasten und MSZ effizient mit Markergenen und dem anti-entz{\"u}ndlichen IL1RA Transgen zu transduzieren. Die dabei erzielten Transgenlevel sind in der Lage, die Effekte von hochdosiertem IL1 zu blockieren. Die Ergebnisse sprechen daf{\"u}r, dass FVV sehr effiziente Werkzeuge f{\"u}r den ex vivo Gentransfer sind und unterstreichen ihr großes Potential f{\"u}r die Bereitstellung anti-entz{\"u}ndlicher Transgene in prim{\"a}ren Zellen und Geweben. Zuk{\"u}nftig soll diese Technologie in Tiermodellen der Arthritis angewendet werden. Das Fernziel der Arbeiten besteht in der Etablierung und Evaluierung eines Gentransfersystems, welches die in vivo Applikation am Menschen erlaubt.},
  subject      = {Rheumatoide Arthritis},
  language  = {de}
}
@article{ArmbrusterKriegWeissenbergeretal.2017,
  author    = {Armbruster, Nicole and Krieg, Jennifer and Weißenberger, Manuel and Scheller, Carsten and Steinert, Andre F.},
  title     = {Rescued Chondrogenesis of Mesenchymal Stem Cells under Interleukin 1 Challenge by Foamyviral Interleukin 1 Receptor Antagonist Gene Transfer},
  series = {Frontiers in Pharmacology},
  volume    = {8},
  journal   = {Frontiers in Pharmacology},
  number    = {255},
  doi       = {10.3389/fphar.2017.00255},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-170919},
  year      = {2017},
  abstract  = {Background: Mesenchymal stem cells (MSCs) and their chondrogenic differentiation have been extensively investigated in vitro as MSCs provide an attractive source besides chondrocytes for cartilage repair therapies. Here we established prototype foamyviral vectors (FVV) that are derived from apathogenic parent viruses and are characterized by a broad host range and a favorable integration pattern into the cellular genome. As the inflammatory cytokine interleukin 1 beta (IL1β) is frequently present in diseased joints, the protective effects of FVV expressing the human interleukin 1 receptor antagonist protein (IL1RA) were studied in an established in vitro model (aggregate culture system) of chondrogenesis in the presence of IL1β. Materials and Methods: We generated different recombinant FVVs encoding enhanced green fluorescent protein (EGFP) or IL1RA and examined their transduction efficiencies and transgene expression profiles using different cell lines and human primary MSCs derived from bone marrow-aspirates. Transgene expression was evaluated by fluorescence microscopy (EGFP), flow cytometry (EGFP), and ELISA (IL1RA). For evaluation of the functionality of the IL1RA transgene to block the inhibitory effects of IL1β on chondrogenesis of primary MSCs and an immortalized MSC cell line (TERT4 cells), the cells were maintained following transduction as aggregate cultures in standard chondrogenic media in the presence or absence of IL1β. After 3 weeks of culture, pellets were harvested and analyzed by histology and immunohistochemistry for chondrogenic phenotypes. Results: The different FVV efficiently transduced cell lines as well as primary MSCs, thereby reaching high transgene expression levels in 6-well plates with levels of around 100 ng/ml IL1RA. MSC aggregate cultures which were maintained in chondrogenic media without IL1β supplementation revealed a chondrogenic phenotype by means of strong positive staining for collagen type II and matrix proteoglycan (Alcian blue). Addition of IL1β was inhibitory to chondrogenesis in untreated control pellets. In contrast, foamyviral mediated IL1RA expression rescued the chondrogenesis in pellets cultured in the presence of IL1β. Transduced MSC pellets reached thereby very high IL1RA transgene expression levels with a peak of 1087 ng/ml after day 7, followed by a decrease to 194 ng/ml after day 21, while IL1RA concentrations of controls were permanently below 200 pg/ml. Conclusion: Our results indicate that FVV are capable of efficient gene transfer to MSCs, while reaching IL1RA transgene expression levels, that were able to efficiently block the impacts of IL1β in vitro. FVV merit further investigation as a means to study the potential as a gene transfer tool for MSC based therapies for cartilage repair.},
  language  = {en}
}
@phdthesis{Averbeck2021,
  author    = {Averbeck, Nadja Mirjam},
  title     = {Der Einfluss von niedrig-dosiertem Prednisolon auf die T-Zell-Aktivierung bei Patienten mit HIV-Infektion},
  doi       = {10.25972/OPUS-22486},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-224866},
  school      = {Universit{\"a}t W{\"u}rzburg},
  year      = {2021},
  abstract  = {Hintergrund: Die HIV-Infektion wird von einer allgemeinen Hyperimmunaktivierung begleitet, die wahrscheinlich eine treibende Kraft in der Pathogenese der Entwicklung von AIDS darstellt. Im Rahmen einer 24-monatigen, Placebo-kontrollierten, randomisierten Doppelblindstudie wurde in unserer Arbeitsgruppe der Einfluss von gering-dosiertem Prednisolon (5 mg/Tag) auf die Progression der Erkrankung untersucht (ProCort-Studie, clinicaltrials.gov NCT01299948). Es konnte gezeigt werden, dass gering-dosiertes Prednisolon bei weiblichen Studienteilnehmerinnen zu einer signifikant verlangsamten Progression hin zum Studienendpunkt AIDS gef{\"u}hrt hat. Die immunologischen Grundlagen dieses Effektes sind noch nicht ausreichend verstanden. Es ist bekannt, dass die HIV-Infektion zu einer Zunahme der aktivierten T-Zellen im Blut f{\"u}hrt und dass der Anteil dieser aktivierten T-Zellen mit der Krankheitsprogression korreliert. Diese T-Zell Hyperaktivierung wird unter antiretroviraler Behandlung wieder normalisiert. In der vorliegenden Arbeit sollte der Einfluss der Prednisolon-Behandlung auf die T-Zell-Aktivierung untersucht werden, um zu verstehen, ob die Prenisolon-Behandlung {\"a}hnliche positive Effekte auf das Immunsystem hat, wie die antiretrovirale Therapie. Methoden: In dieser Studie wurden insgesamt 154 PBMC-Proben (77 Placebo, 77 Prednisolon) des Studienzeitpunktes 12 Monate untersucht. Die PBMC wurden mit Fluorochrom-markierten Antik{\"o}rpern gegen CD3 (PerCP-Cy 5.5), CD8 (FITC), CD38 (PE) und HLA-DR (APC) gef{\"a}rbt und durchflusszytometrisch analysiert. Folgende Populationen wurden definiert: T-Zellen (CD3+), CD8-positive T Zellen (CD3+/CD8+), CD4-positive T Zellen (CD3+/CD8-), aktivierte T Zellen (CD38+/HLA-DR+). Eine statistische Analyse der Daten erfolgte mit Hilfe der GraphPad Prism Software. Ergebnisse: Patienten mit Prednisolon-Behandlung zeigten im Vergleich zu Patienten mit Placebo-Behandlung eine geringere Aktivierung der CD8+ T Zellen (median 8.04 \% [CI95\% 8.158-11.54]) vs. median 9.74 \% [CI95\% 9.71-13.05] sowie der CD4+ T Zellen (median 6.910\% [CI95\% 6.862-8.721] vs. median 8.185 \% [CI95\% 8.088-10.49]). Die Unterschiede sind jedoch statistisch nicht signifikant (p=0.1250 bzw. p=0.1032, U test). Bei einer Stratifizierung der Daten nach Geschlecht erreichten die festgestellten Unterschiede zwischen Placebo- und Prednisolonbehandlung bei weiblichen Studienteilnehmern statistische Signifikanz (CD8+ Aktivierung: median 7.3 \% [CI95\% 7.413-10.26] vs. median 10.3 \% [CI95\% 9.927-13.69], p = 0.0248, U-test), sowie der CD4+ T Zellen (median 6.735\% [CI95\% 6.448-8.476] vs. (median 8.36\% [CI95\% 8.274-10.72], p = 0.0158, U-test), w{\"a}hrend bei m{\"a}nnlichen Studienteilnehmern kein Unterschied auftrat. Die Lymphozytenaktivierung zeigte eine positive Korrelation zur HIV-Viruslast (p = 0.0521 f{\"u}r CD8+ und p = 0.0078 f{\"u}r CD4+, lineare Regression) und zum Immunaktivierungsmarker sCD14 (p = 0.0075 f{\"u}r CD8+ und p < 0.0085 f{\"u}r CD4+, lineare Regression) und zum Aktivierungsmarker supar (p = 0.0261 f{\"u}r CD8+ und p < 0.0001 f{\"u}r CD4+, lineare Regression). Aktivierte CD4+ Zellen zeigten eine positive, aktivierte CD8+ Zellen eine negative Korrelation zum Anteil an memory-B-Zellen (p = 0.0080 f{\"u}r CD8+ und p < 0.0001 f{\"u}r CD4+, lineare Regression). In einer Kaplan-Meyer-Analyse innerhalb des Placebo-Arms zeigten Patienten mit einer h{\"o}herne Immunaktivierung bei CD8+ T-Lymphozyten (Quartilen Q1 und Q2) eine signifikant schnellere Progression zu AIDS als Patienten mit einer niedrigen Immunaktivierung (Quartilen Q3 und G4, p = 0.0176). Diskussion: In dieser Arbeit konnte gezeigt werden, dass Studienteilnehmerinnen mit Prednisolon-Behandlung zum Zeitpunkt 12 Monate eine signifikant niedrigere Lymphozytenaktivierung zeigen als Studienteilnehmerinnen mit Placebo-Behandlung. Die Prednisolon-vermittelte Reduktion der Immunaktivierung korrelierte mit verlangsamter Krankheitsprogression. Die HIV-induzierte Immunaktivierung ist damit ein treibender Faktor in der Progression der Erkrankung. Immunmodulatorische Therapien bei Patienten mit ungen{\"u}gender Immunrekonstitution unter antiretroviraler Behandlung k{\"o}nnten daher m{\"o}glicherweise einen positiven Behandlungseffekt erzielen. Zielsetzung dieser Arbeit ist die Bestimmung der Aktivierung von CD8+ und CD4+ T-Lymphozyten bei Teilnehmern eines RCT, in dem der Effekt von niedrig-dosiertem Prednisolon auf die Progression der HIV-Infektion untersucht werden sollte. Die Ergebnisse sollten mit der Art der Behandlung (Placebo oder Prednisolon), weiteren Markern der Immunaktivierung sowie der Viruslast korreliert werden und der Effekt auf die Krankheitsprogression untersucht werden. Aus diesen Ergebnissen sollten R{\"u}ckschl{\"u}sse auf die Effekte von Prednisolon auf das Immunsystem, sowie ein besseres Verst{\"a}ndnis der Immunpathogenese der Infektion gewonnen werden.},
  subject      = {HIV-Infektion},
  language  = {de}
}
@article{AvotaBodemChithelenetal.2021,
  author    = {Avota, Elita and Bodem, Jochen and Chithelen, Janice and Mandasari, Putri and Beyersdorf, Niklas and Schneider-Schaulies, J{\"u}rgen},
  title     = {The Manifold Roles of Sphingolipids in Viral Infections},
  series = {Frontiers in Physiology},
  volume    = {12},
  journal   = {Frontiers in Physiology},
  issn      = {1664-042X},
  doi       = {10.3389/fphys.2021.715527},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-246975},
  year      = {2021},
  abstract  = {Sphingolipids are essential components of eukaryotic cells. In this review, we want to exemplarily illustrate what is known about the interactions of sphingolipids with various viruses at different steps of their replication cycles. This includes structural interactions during entry at the plasma membrane or endosomal membranes, early interactions leading to sphingolipid-mediated signal transduction, interactions with internal membranes and lipids during replication, and interactions during virus assembly and budding. Targeted interventions in sphingolipid metabolism - as far as they can be tolerated by cells and organisms - may open novel possibilities to support antiviral therapies. Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infections have intensively been studied, but for other viral infections, such as influenza A virus (IAV), measles virus (MV), hepatitis C virus (HCV), dengue virus, Ebola virus, and severe acute respiratory syndrome coronavirus type 2 (SARS-CoV-2), investigations are still in their beginnings. As many inhibitors of sphingolipid metabolism are already in clinical use against other diseases, repurposing studies for applications in some viral infections appear to be a promising approach.},
  language  = {en}
}
@article{AvotadeLiraSchneiderSchaulies2019,
  author    = {Avota, Elita and de Lira, Maria Nathalia and Schneider-Schaulies, Sibylle},
  title     = {Sphingomyelin breakdown in T cells: role of membrane compartmentalization in T cell signaling and interference by a pathogen},
  series = {Frontiers in Cell and Developmental Biology},
  volume    = {7},
  journal   = {Frontiers in Cell and Developmental Biology},
  number    = {152},
  issn      = {2296-634X},
  doi       = {10.3389/fcell.2019.00152},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-199168},
  year      = {2019},
  abstract  = {Sphingolipids are major components of cellular membranes, and at steady-state level, their metabolic fluxes are tightly controlled. On challenge by external signals, they undergo rapid turnover, which substantially affects the biophysical properties of membrane lipid and protein compartments and, consequently, signaling and morphodynamics. In T cells, external cues translate into formation of membrane microdomains where proximal signaling platforms essential for metabolic reprograming and cytoskeletal reorganization are organized. This review will focus on sphingomyelinases, which mediate sphingomyelin breakdown and ensuing ceramide release that have been implicated in T-cell viability and function. Acting at the sphingomyelin pool at the extrafacial or cytosolic leaflet of cellular membranes, acid and neutral sphingomyelinases organize ceramide-enriched membrane microdomains that regulate T-cell homeostatic activity and, upon stimulation, compartmentalize receptors, membrane proximal signaling complexes, and cytoskeletal dynamics as essential for initiating T-cell motility and interaction with endothelia and antigen-presenting cells. Prominent examples to be discussed in this review include death receptor family members, integrins, CD3, and CD28 and their associated signalosomes. Progress made with regard to experimental tools has greatly aided our understanding of the role of bioactive sphingolipids in T-cell biology at a molecular level and of targets explored by a model pathogen (measles virus) to specifically interfere with their physiological activity.},
  language  = {en}
}
@article{AvotaGassertSchneiderSchaulies2011,
  author    = {Avota, Elita and Gassert, Evelyn and Schneider-Schaulies, Sibylle},
  title     = {Cytoskeletal Dynamics: Concepts in Measles Virus Replication and Immunomodulation},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-69092},
  year      = {2011},
  abstract  = {In common with most viruses, measles virus (MV) relies on the integrity of the cytoskeleton of its host cells both with regard to efficient replication in these cells, but also retention of their motility which favors viral dissemination. It is, however, the surface interaction of the viral glycoprotein (gp) complex with receptors present on lymphocytes and dendritic cells (DCs), that signals effective initiation of host cell cytoskeletal dynamics. For DCs, these may act to regulate processes as diverse as viral uptake and sorting, but also the ability of these cells to successfully establish and maintain functional immune synapses (IS) with T cells. In T cells, MV signaling causes actin cytoskeletal paralysis associated with a loss of polarization, adhesion and motility, which has been linked to activation of sphingomyelinases and subsequent accumulation of membrane ceramides. MV modulation of both DC and T cell cytoskeletal dynamics may be important for the understanding of MV immunosuppression at the cellular level.},
  subject      = {Virologie},
  language  = {en}
}
@article{AvotaGulbinsSchneiderSchaulies2011,
  author    = {Avota, Elita and Gulbins, Erich and Schneider-Schaulies, Sibylle},
  title     = {DC-SIGN Mediated Sphingomyelinase-Activation and Ceramide Generation Is Essential for Enhancement of Viral Uptake in Dendritic Cells},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-69056},
  year      = {2011},
  abstract  = {As pattern recognition receptor on dendritic cells (DCs), DC-SIGN binds carbohydrate structures on its pathogen ligands and essentially determines host pathogen interactions because it both skews T cell responses and enhances pathogen uptake for cis infection and/or T cell trans-infection. How these processes are initiated at the plasma membrane level is poorly understood. We now show that DC-SIGN ligation on DCs by antibodies, mannan or measles virus (MV) causes rapid activation of neutral and acid sphingomyelinases followed by accumulation of ceramides in the outer membrane leaflet. SMase activation is important in promoting DC-SIGN signaling, but also for enhancement of MV uptake into DCs. DCSIGN-dependent SMase activation induces efficient, transient recruitment of CD150, which functions both as MV uptake receptor and microbial sensor, from an intracellular Lamp-1+ storage compartment shared with acid sphingomyelinase (ASM) within a few minutes. Subsequently, CD150 is displayed at the cell surface and co-clusters with DC-SIGN. Thus, DCSIGN ligation initiates SMase-dependent formation of ceramide-enriched membrane microdomains which promote vertical segregation of CD150 from intracellular storage compartments along with ASM. Given the ability to promote receptor and signalosome co-segration into (or exclusion from) ceramide enriched microdomains which provide a favorable environment for membrane fusion, DC-SIGN-dependent SMase activation may be of general importance for modes and efficiency of pathogen uptake into DCs, and their routing to specific compartments, but also for modulating T cell responses.},
  subject      = {Dendritische Zelle},
  language  = {en}
}
@article{AvotaSchneiderSchaulies2014,
  author    = {Avota, Elita and Schneider-Schaulies, Sibylle},
  title     = {The Role of Sphingomyelin Breakdown in Measles Virus Immunmodulation},
  series = {Cellular Physiology and Biochemistry},
  volume    = {34},
  journal   = {Cellular Physiology and Biochemistry},
  number    = {1},
  issn      = {1015-8987},
  doi       = {10.1159/000362981},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-120004},
  pages     = {20-26},
  year      = {2014},
  abstract  = {Measles virus (MV) efficiently causes generalized immunosuppression which accounts to a major extent for cases of measles-asscociated severe morbidity and mortality. MV infections alter many functions of antigen presenting cells (APC) (dendritic cells (DCs)) and lymphocytes, yet many molecular targets of the virus remain poorly defined. Cellular interactions and effector functions of DCs and lymphocytes are regulated by surface receptors. Associating with other proteins involved in cell signaling, receptors form part of receptosomes that respond to and transmit external signals through dynamic interctions with the cytoskeleton. Alterations in the composition and metabolism of membrane sphingolipids have a substantial impact on both processes. In this review we focus on the regulation of sphingomyelinase activity and ceramide release in cells exposed to MV and discuss the immunosuppressive role of sphingomyelin breakdown induced by MV.},
  language  = {en}
}
@phdthesis{Bach2007,
  author    = {Bach, Patricia},
  title     = {Immunogenicity of antigen-displaying virus-like particles and their use as a potential vaccine against prion diseases},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-25889},
  school      = {Universit{\"a}t W{\"u}rzburg},
  year      = {2007},
  abstract  = {Transmissible spongiform encephalopathies (TSEs) or prion diseases are a group of infectious neurodegenerative diseases that are associated with misfolding of the cellular form of the cellular prion protein (PrPC) into a disease associated conformer (PrPSc). No therapy for prion diseases is available at present. So far, anti-PrPC vaccination is hampered by immunological tolerance of the mammalian immune system to endogenous PrPC. The aim of this thesis was to set up a new vaccination strategy based on virus-like particles (VLP) to induce anti-PrPC antibody responses in PrPC-competent mice. In a first step it was assessed whether VLP have the capacity to induce antibody responses that are protective against conventional pathogens. For this purpose, VLP displaying the vesicular stomatitis virus-gylcoprotein (VLP-VSV) were generated and tested for their immunogenicity. Similarly to live vesicular stomatitis virus (VSV), replication deficient VLP-VSV induced T help-independent VSV neutralizing IgM responses that switched to the IgG subclass in a T help-dependent manner. Furthermore, type I IFN receptor (IFNAR) triggering only marginally affected VLP-VSV induced neutralizing IgM responses, whereas it was critically required to promote the IgG switch. The analysis of conditional knockout mice with a lymphocyte-specific IFNAR deletion revealed that IFNAR triggering of lymphocytes did not play a crucial role, neither upon VLP-VSV nor VSV immunization. Collectively, these data verified the high immunogenicity of VLP. Therefore, in a next step VLP were generated displaying the C-terminal half of PrP (residues 121-231aa) fused to the platelet derived growth factor receptor (PDGFR) transmembrane region (VLP-PrPD111) for anti-PrPC immunization. On the surface of such retroparticles, PrPC was expressed at high levels as determined by electron microscopy. VLP-PrPD111 immunization of Prnp-deficient (Prnp0/0) mice resulted in antibody response specifically binding the cellular form of PrPC. Upon intravenous injection of wild-type mice, high PrPC-specific IgM responses were induced, whereas the T cell-dependent switch from the IgM to the IgG subclass was less pronounced. As a consequence, anti-PrPC titers were rather short-lived. The impaired subclass switch was probably related with host T cell tolerance to endogenous PrPC. Attempts to increase anti-PrPC IgG responses in wild-type mice via administration of VLP-PrPD111 emulsified in various different adjuvants failed. Nevertheless, in single individuals low IgG antibodies were induced after immunization of VLP-PrPD111 emulsified in CFA. To circumvent T cell tolerance in wild-type mice, a multitude of different immunization strategies was tested, including priming and boosting protocols with different types of VLP or VLP expressing PrPC together with foreign T helper epitopes. Overall, those efforts did not improve anti-PrPC IgG responses in wild-type mice. Interestingly, anti-PrPC antibodies induced in Prnp0/0 mice reduced PrPSc levels in prion infected cell cultures, whereas serum of vaccinated wild-type mice did not. To assess the protective capacity of VLP-PrPD111 induced immune responses, vaccinated wild-type mice were infected with scrapie (RML 5.0). Unfortunately, vaccinated mice did not show a significant delay in the onset of scrapie. In a last part of the thesis it was studied whether in the absence of T cell help activated "memory" B cells were able to produce anti-PrPC specific antibodies. To address this question, PrPC-specific memory B cells were sorted from vaccinated Prnp0/0 mice and adoptively transferred into wild-type recipient mice. Upon VLP-PrPD111 challenge, no PrPC-specific IgG titers were induced in the recipients. Nevertheless, several VLP-PrPD111 challenged recipient mice were protected against scrapie infection. In conclusion, VLP were characterized as highly immunogenic vaccines that were used to elucidate various questions concerning adaptive immune response and basic mechanisms of PrPC-specific tolerance vs. immunity. Remarkably, VLP-PrPD111 was able to induce native PrPC-specific antibodies in wild-type mice but major difficulties associated with PrPC-specific tolerance made efficacious scrapie vaccination impossible. New vaccination approaches are being tested to overcome these limitations.},
  subject      = {Prion},
  language  = {en}
}
@article{BadrMcFlederWuetal.2022,
  author    = {Badr, Mohammad and McFleder, Rhonda L. and Wu, Jingjing and Knorr, Susanne and Koprich, James B. and H{\"u}nig, Thomas and Brotchie, Jonathan M. and Volkmann, Jens and Lutz, Manfred B. and Ip, Chi Wang},
  title     = {Expansion of regulatory T cells by CD28 superagonistic antibodies attenuates neurodegeneration in A53T-α-synuclein Parkinson's disease mice},
  series = {Journal of Neuroinflammation},
  volume    = {19},
  journal   = {Journal of Neuroinflammation},
  doi       = {10.1186/s12974-022-02685-7},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-300580},
  year      = {2022},
  abstract  = {Background Regulatory CD4\(^+\)CD25\(^+\)FoxP3\(^+\) T cells (Treg) are a subgroup of T lymphocytes involved in maintaining immune balance. Disturbance of Treg number and impaired suppressive function of Treg correlate with Parkinson's disease severity. Superagonistic anti-CD28 monoclonal antibodies (CD28SA) activate Treg and cause their expansion to create an anti-inflammatory environment. Methods Using the AAV1/2-A53T-α-synuclein Parkinson's disease mouse model that overexpresses the pathogenic human A53T-α-synuclein (hαSyn) variant in dopaminergic neurons of the substantia nigra, we assessed the neuroprotective and disease-modifying efficacy of a single intraperitoneal dose of CD28SA given at an early disease stage. Results CD28SA led to Treg expansion 3 days after delivery in hαSyn Parkinson's disease mice. At this timepoint, an early pro-inflammation was observed in vehicle-treated hαSyn Parkinson's disease mice with elevated percentages of CD8\(^+\)CD69\(^+\) T cells in brain and increased levels of interleukin-2 (IL-2) in the cervical lymph nodes and spleen. These immune responses were suppressed in CD28SA-treated hαSyn Parkinson's disease mice. Early treatment with CD28SA attenuated dopaminergic neurodegeneration in the SN of hαSyn Parkinson's disease mice accompanied with reduced brain numbers of activated CD4\(^+\), CD8\(^+\) T cells and CD11b\(^+\) microglia observed at the late disease-stage 10 weeks after AAV injection. In contrast, a later treatment 4 weeks after AAV delivery failed to reduce dopaminergic neurodegeneration. Conclusions Our data indicate that immune modulation by Treg expansion at a timepoint of overt inflammation is effective for treatment of hαSyn Parkinson's disease mice and suggest that the concept of early immune therapy could pose a disease-modifying option for Parkinson's disease patients.},
  language  = {en}
}
@phdthesis{Bahlo2008,
  author    = {Bahlo, Angela},
  title     = {Immunisierungsstrategien gegen Prionenerkrankungen und Untersuchungen zur Prionen-induzierten Neurodegeneration},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-28443},
  school      = {Universit{\"a}t W{\"u}rzburg},
  year      = {2008},
  abstract  = {Prionenerkrankungen oder Transmissible Spongiforme Enzephalopathien (TSEs) sind {\"u}bertragbare Krankheiten, zu denen die Creutzfeldt-Jakob-Krankheit (CJD) beim Menschen, Scrapie bei Schafen und die Bovine Spongiforme Enzephalopathie (BSE) bei Rindern geh{\"o}ren. Der infekti{\"o}se Erreger (PrPSc) besteht dabei aus einer abnormalen Form des zellul{\"a}ren Prion-Proteins (PrPC) und unterscheidet sich von dieser nur in der Proteinstruktur. Ein Hauptproblem bei der Entwicklung von aktiven Immunisierungsstrategien gegen Prionenerkrankungen besteht in der fehlenden Reaktion des Immunsystems auf das ubiquit{\"a}r exprimierte Selbst-Antigen PrPC, welche auf einer Immuntoleranz gegen das k{\"o}rpereigene Protein beruht. In dieser Arbeit wurde ein transgenes Mausmodell f{\"u}r aktive Immunisierungsexperimente verwendet. Diese transgenen Tiere exprimieren Hamster-PrPC (HaPrP) unter der Kontrolle des Neuronen-spezifischen Enolase-Promotors (NSE) ausschließlich im Nervensystem auf einem Prnpo/o-Hintergrund. Durch die Verwendung eines „artfremden" Proteins (rekombinantes Maus-PrP) gegen endogenes Hamster-PrP als Vakzine sollte die Immunogenit{\"a}t des Proteins verst{\"a}rkt werden. Zus{\"a}tzlich wurde f{\"u}r die Immunisierungen ein Fusionsprotein aus Maus-PrP und einem T-Helferepitop des Tetanustoxins (P30) eingesetzt. Als Adjuvanz diente das bakterielle DNA-Motiv CpG-1826, welches die F{\"a}higkeit besitzt T-und B-Lymphozyten direkt zu stimulieren und die Sekretion von Interleukinen zu induzieren. Die Immunisierungen erfolgten subkutan und wurden monatlich durchgef{\"u}hrt. Nach jedem Boost wurden die Blutseren auf Antik{\"o}rper sowohl gegen Maus-PrP als auch gegen Hamster-PrP untersucht. Neben der Analyse der humoralen Immunantwort mittels ELISA, Westernblot und FACS, wurden die Seren der immunisierten M{\"a}use auf ihre F{\"a}higkeit getestet, die Prionenreplikation in vitro zu inhibieren. Mit der gew{\"a}hlten Immunisierungsstrategie war es mit beiden Proteinen m{\"o}glich, hohe Antik{\"o}rperantworten sowohl gegen Maus- als auch gegen Hamster-Prion-Protein zu induzieren. In Zellkultur waren die Seren in der Lage, signifikant den PrPSc-Gehalt zu reduzieren. Die immunisierten M{\"a}use wurden mit Hamsterprionen infiziert, um den Einfluss der induzierten Antik{\"o}rper auf den Verlauf der Krankheit zu untersuchen. Nach Immunisierung mit PrP-P30 zeigten die M{\"a}use gegen{\"u}ber mit Ovalbumin-behandelten Kontrolltiere eine signifikant verl{\"a}ngerte Inkubationszeit von ca. 30\%. Im Gegensatz dazu konnte nach Immunisierung mit PrP ohne das zus{\"a}tzliche T-Helferepitop keine Verl{\"a}ngerung in den Inkubationszeiten beobachtet werden. Abschließend wurde die Immunantwort in den immunisierten Tieren auf zellul{\"a}rer Ebene mittels Proliferationsanalyse von T-und B-Lymphozyten untersucht. Daf{\"u}r wurden Lymphozyten aus Milz und Lymphknoten der immunisierten NSEHa-Prnpo/o_M{\"a}usen isoliert, ex vivo mit Maus-PrP bzw. Hamster-PrP stimuliert und auf die Proliferation von CD4-positiven oder CD8-positiven T-Lymphozyten untersucht. Durch die Analyse wurde gezeigt, dass es nach Immunisierung mit rek.PrP oder PrP-P30 zu keiner spezifischen Proliferation von T-Lymphozyten kam. Die beobachtete humorale Immunantwort scheint also unabh{\"a}ngig von einer spezifischen T-Zell-Immunantwort zu wirken. Die vorliegenden Ergebnisse zeigen, dass es m{\"o}glich ist, durch die Wahl von geeigneten Immunisierungsstrategien, die Toleranz gegen das Selbstprotein PrP zu brechen. Sie stellen eine Grundlage f{\"u}r weitere Forschungsans{\"a}tze dar, um prophylaktische Immunisierungen gegen Prionenerkrankungen in Zukunft zu realisieren. In einem weiteren Teil der Arbeit wurde die Funktion der apoptotischen Faktoren BAX und BCL-2 in der Prionen-induzierten Neurodegeneration in vivo untersucht. Dazu wurde neuroektodermales Gewebe aus BAX-/- und BCL-2-/- -Embryonen in das Gehirn von PrP-Knockout-M{\"a}usen (Prnpo/o) transplantiert. Diese PrPC-defizienten Tiere sind nicht mit Prionen infizierbar und k{\"o}nnen PrPSc nicht propagieren. Nach Langzeitinfektion mit Mausprionen wurden die Transplantate histochemisch auf Prionenpathologie untersucht. Die typischen neuropathologischen Ver{\"a}nderungen waren dabei strikt auf das PrPC-positive Transplantat begrenzt. Zus{\"a}tzlich wurden die Transplantate auf apoptotische Ver{\"a}nderungen untersucht und dabei TUNEL-F{\"a}rbungen und aktivierte-Caspase-3 F{\"a}rbungen durchgef{\"u}hrt. Es zeigten sich hierbei hinsichtlich Auspr{\"a}gung und St{\"a}rke der Pathologie keine Unterschiede zwischen den BAX-bzw. BCL-2-Knockout Transplantaten und wildtypischen Transplantaten. Daraus konnte gefolgert werden, dass in diesem Modell weder BAX noch BCL-2 eine signifikante Rolle bei der Prionenpathogenese spielen. Die Ergebnisse aus diesem Teil der Arbeit leisten einen wichtigen Beitrag f{\"u}r das bessere Verst{\"a}ndnis der durch Prionen-induzierten Neurodegeneration und sind f{\"u}r die Entwicklung von potentiellen therapeutischen Strategien hilfreich.},
  subject      = {Impfung},
  language  = {de}
}
@article{BaptistaKeszeiOliveiraetal.2016,
  author    = {Baptista, Marisa A.P. and Keszei, Marton and Oliveira, Mariana and Sunahara, Karen K.S. and Andersson, John and Dahlberg, Carin I.M. and Worth, Austen J. and Lied{\´e}n, Agne and Kuo, I-Chun and Wallin, Robert P.A. and Snapper, Scott B. and Eidsmo, Liv and Scheynius, Annika and Karlsson, Mikael C.I. and Bouma, Gerben and Burns, Siobhan O. and Forsell, Mattias N.E. and Thrasher, Adrian J. and Nyl{\´e}n, Susanne and Westerberg, Lisa S.},
  title     = {Deletion of Wiskott-Aldrich syndrome protein triggers Rac2 activity and increased cross-presentation by dendritic cells},
  series = {Nature Communications},
  volume    = {7},
  journal   = {Nature Communications},
  doi       = {10.1038/ncomms12175},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-165966},
  pages     = {12175},
  year      = {2016},
  abstract  = {Wiskott-Aldrich syndrome (WAS) is caused by loss-of-function mutations in theWASp gene. Decreased cellular responses in WASp-deficient cells have been interpreted to mean that WASp directly regulates these responses in WASp-sufficient cells. Here, we identify an exception to this concept and show that WASp-deficient dendritic cells have increased activation of Rac2 that support cross-presentation to CD8þ T cells. Using two different skin pathology models, WASp-deficient mice show an accumulation of dendritic cells in the skin and increased expansion of IFNg-producing CD8þ T cells in the draining lymph node and spleen. Specific deletion of WASp in dendritic cells leads to marked expansion of CD8þ T cells at the expense of CD4þ T cells. WASp-deficient dendritic cells induce increased cross-presentation to CD8þ T cells by activating Rac2 that maintains a near neutral pH of phagosomes. Our data reveals an intricate balance between activation of WASp and Rac2 signalling pathways in dendritic cells.},
  language  = {en}
}