@phdthesis{Dressler2005,
  author    = {Dressler, Marco},
  title     = {Charakterisierung eines foamyviralen Vektorsystems},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-16597},
  school      = {Universit{\"a}t W{\"u}rzburg},
  year      = {2005},
  abstract  = {Ein bestehendes replikationsinkompetentes PFV-Vektorsystem sollte charakterisiert und optimiert werden. Dieses Ziel sollte durch Erg{\"a}nzung von zus{\"a}tzlichen Sicherheitsmassnahmen und der Verringerung der enthaltenen viralen Sequenzen erreicht werden. Basierend auf einem replikationsdefizienten PFV-Vektor wurde in dieser Arbeit ein modifizierter PFV-Vektor konstruiert. Dieser Vektor enth{\"a}lt die minimalen f{\"u}r einen effiziente Transduktion ben{\"o}tigten Sequenzen (Gesamtgr{\"o}ße 3,1 kbp) und ein theoretisches Verpackungslimit von 8,5 kb sowie zus{\"a}tzliche Sicherheitsmerkmale. Die 3' U3-Region wurde auf eine Gr{\"o}sse von 442 bp reduziert, enthalten sind 5' Sequenzen der U3-Region und der {\"U}bergang von der U3 in die R-Region. Diese Massnahme erh{\"o}ht das Verpackungslimit und schaltet eine m{\"o}gliche Aktivierung des U3-Promotors in Abwesenheit des foamyviralen Transaktivators (Tas) durch zellul{\"a}re Transkriptionsfaktoren aus. Zur Vermeidung einer aberranten Proteinexpression wurde das gag Startkodon durch Mutation ausgeschaltet, und ein Stopkodon in den gag-Leseraster eingef{\"u}gt. Mittels Western-Blot wurde das Ausbleiben der Gag-Expression best{\"a}tigt. Sowohl die f{\"u}r einen optimalen Gentransfer ben{\"o}tigte Gr{\"o}sse der cis-aktiven Sequenzen des Vektors, als auch die bevorzugte Lage der cis-aktiven Sequenzen des Vektors in Bezug auf die Expressionkassette des Vektors wurden ermittelt. Der Vektor wurde in Modulbauweise konzipiert, um ein einfaches Austauschen der einzelnen Komponenten zu gew{\"a}hrleisten. Es konnte gezeigt werden, dass die Modifikationen am Vektor keine negativen Auswirkungen auf die Transduktionsraten gegen{\"u}ber dem Ausgangsvektor hatten. Mit dem Vektor pMD11 konnten Vektortiter von 6,4x104 infekti{\"o}se Partikel pro ml {\"U}berstand generiert werden. Ein Zentrifugationsprotokoll f{\"u}r PFV-Vektoren zur Steigerung des Vektor-Titers auf das zwanzigfache des Ursprungs-Vektortiters bei 15000g wurde beschrieben und charakterisiert. Eine erfolgreiche Methode zur Kryoprotektion von PFV-Vektoren durch Zugabe von DMSO und Lagerung bei -80°C wurde entwickelt und quantifiziert. Im Rahmen dieser Arbeit wurde ein PFV-Vektor mit minimalen viralen Sequenzen und dadurch gesteigertem Verpackungslimit sowie zus{\"a}tzlichen Sicherheitsmerkmalen},
  language  = {de}
}