@phdthesis{Strehl2006,
  author    = {Strehl, Amrei},
  title     = {Studies on regulation and signaling of the platelet glycoproteins GPV and GPVI},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-22283},
  school      = {Universit{\"a}t W{\"u}rzburg},
  year      = {2006},
  abstract  = {Bei Verletzung einer Gef{\"a}ßwand kommen Blutpl{\"a}ttchen in Kontakt mit den Substanzen des Subendothels; Die Pl{\"a}ttchen werden dadurch aktiviert, sie aggregieren und verschließen die Wunde, wodurch ein hoher Blutverlust verhindert wird. Unter pathologischen Bedingungen, bei Aufbrechen eines artherosklerotischen Plaques an der Gef{\"a}ßwand, k{\"o}nnen sich jedoch große Pl{\"a}ttchenaggregate, die Thromben, formen, die das Gef{\"a}ß verschließen, den Blutfluss stoppen und somit zu Schlaganfall und Herzinfarkt f{\"u}hren k{\"o}nnen. Die kontrollierte Regulation und Signaltransduktion von bzw. durch Pl{\"a}ttchenoberfl{\"a}chenrezeptoren ist wesentlich f{\"u}r das Funktionieren der Zellen und die intakte Balance zwischen physiologischer Pl{\"a}ttchen-Aktivierung und der pathologischen Bildung eines Thrombus. In der vorliegenden Arbeit wird {\"u}ber wichtige Aspekte dieser Signalwege, die in drei Unterprojekten untersucht worden sind, berichtet. In dem ersten Unterprojekt wurde die Regulation von Pl{\"a}ttchenoberfl{\"a}chenrezeptoren, den Glykoproteinen (GP) V und VI, bei M{\"a}usen analysiert. Hier wird beschrieben, dass GPV und GPVI von der Pl{\"a}ttchenoberfl{\"a}che durch Metalloproteinasen geschnitten werden. W{\"a}hrend physiologischer Stress, wie das Entkoppeln der oxidativen Phosphorylierung in den Mitochondrien, das Schneiden von GPVI durch eine unbekannte Proteinase ausl{\"o}st, verursacht die Aktivierung von Pl{\"a}ttchen mit bestimmten Agonisten das Schneiden von GPV. Die daf{\"u}r verantwortliche Metalloproteinase wurde als ADAM17 identifiziert. In dem zweiten Unterprojekt wurde die Rolle der Protein Kinase C (PKC) in der Pl{\"a}ttchenaktivierung einerseits und in der Pl{\"a}ttchen pro-koagulanten Aktivit{\"a}t andereseits untersucht. Die Konformations{\"a}nderung/Aktivierung von alphaIIbeta3-Integrinen und Sekretion von Granula sind charakteristisch f{\"u}r die Pl{\"a}ttchenaktivierung. Calcium-(Ca2+)-abh{\"a}ngige Phosphatidylserin (PS)- Expression auf der Pl{\"a}ttchenoberfl{\"a}che hingegen ist kennzeichnend f{\"u}r die pro-koagulante Aktivit{\"a}t. Der Beitrag von PKC zu den beschriebenen Pl{\"a}ttchenzust{\"a}nden war bisher unklar. In diesem Projekt wurde zum ersten Mal gezeigt, dass PKC eine doppelte Funktion in den Pl{\"a}ttchen besitzt: einerseits f{\"o}rdert PKC die Pl{\"a}ttchen-Aktivierung und -Aggregation, andererseits unterdr{\"u}ckt PKC die pro-koagulant Aktivit{\"a}t. In dem dritten Unterprojekt wurde die Rolle der kleinen GTPase Rac1 in der Pl{\"a}ttchen- Aktivierung und -Aggregation in vitro und in vivo an konditionalen Rac1 M{\"a}usen analysiert. Es wird berichtet, dass Rac1 f{\"u}r die GPVI abh{\"a}ngige Aktivierung von alphaIIbbeta3-Integrinen und dem Freisetzen von Ca2+ in der Zelle, notwendig ist, sowie f{\"u}r GPVI abh{\"a}ngige Pl{\"a}ttchen-Aggregation und Thrombus Bildung. Hiermit wird die GTPase Rac1 zum ersten Mal in den Signalweg unterhalb von GPVI eingeordnet und ihr zudem dort eine essentielle Rolle zugeteilt.},
  subject      = {Thrombozyt},
  language  = {en}
}
@phdthesis{Neagoe2024,
  author    = {Neagoe, Raluca Alexandra Iulia},
  title     = {Development of techniques for studying the platelet glycoprotein receptors GPVI and GPIb localisation and signalling},
  doi       = {10.25972/OPUS-31306},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-313064},
  school      = {Universit{\"a}t W{\"u}rzburg},
  year      = {2024},
  abstract  = {Platelets play an important role in haemostasis by mediating blood clotting at sites of blood vessel damage. Platelets, also participate in pathological conditions including thrombosis and inflammation. Upon vessel damage, two glycoprotein receptors, the GPIb-IX-V complex and GPVI, play important roles in platelet capture and activation. GPIb-IX-V binds to von Willebrand factor and GPVI to collagen. This initiates a signalling cascade resulting in platelet shape change and spreading, which is dependent on the actin cytoskeleton. This thesis aimed to develop and implement different super-resolution microscopy techniques to gain a deeper understanding of the conformation and location of these receptors in the platelet plasma membrane, and to provide insights into their signalling pathways. We suggest direct stochastic optical reconstruction microscopy (dSTORM) and structured illumination microscopy (SIM) as the best candidates for imaging single platelets, whereas expansion microscopy (ExM) is ideal for imaging platelets aggregates. Furthermore, we highlighted the role of the actin cytoskeleton, through Rac in GPVI signalling pathway. Inhibition of Rac, with EHT1864 in human platelets induced GPVI and GPV, but not GPIbα shedding. Furthermore, EHT1864 treatment did not change GPVI dimerisation or clustering, however, it decreased phospholipase Cγ2 phosphorylation levels, in human, but not murine platelets, highlighting interspecies differences. In summary, this PhD thesis demonstrates that; 1) Rac alters GPVI signalling pathway in human but not mouse platelets; 2) our newly developed ExM protocol can be used to image platelet aggregates labelled with F(ab') fragments},
  subject      = {Platelet-Membranglykoprotein p62},
  language  = {en}
}
@article{NeagoeGardinerStegneretal.2022,
  author    = {Neagoe, Raluca A. I. and Gardiner, Elizabeth E. and Stegner, David and Nieswandt, Bernhard and Watson, Steve P. and Poulter, Natalie S.},
  title     = {Rac inhibition causes impaired GPVI signalling in human platelets through GPVI shedding and reduction in PLCγ2 phosphorylation},
  series = {International Journal of Molecular Sciences},
  volume    = {23},
  journal   = {International Journal of Molecular Sciences},
  number    = {7},
  issn      = {1422-0067},
  doi       = {10.3390/ijms23073746},
  url       = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:20-opus-284350},
  year      = {2022},
  abstract  = {Rac1 is a small Rho GTPase that is activated in platelets upon stimulation with various ligands, including collagen and thrombin, which are ligands for the glycoprotein VI (GPVI) receptor and the protease-activated receptors, respectively. Rac1-deficient murine platelets have impaired lamellipodia formation, aggregation, and reduced PLCγ2 activation, but not phosphorylation. The objective of our study is to investigate the role of Rac1 in GPVI-dependent human platelet activation and downstream signalling. Therefore, we used human platelets stimulated using GPVI agonists (collagen and collagen-related peptide) in the presence of the Rac1-specific inhibitor EHT1864 and analysed platelet activation, aggregation, spreading, protein phosphorylation, and GPVI clustering and shedding. We observed that in human platelets, the inhibition of Rac1 by EHT1864 had no significant effect on GPVI clustering on collagen fibres but decreased the ability of platelets to spread or aggregate in response to GPVI agonists. Additionally, in contrast to what was observed in murine Rac1-deficient platelets, EHT1864 enhanced GPVI shedding in platelets and reduced the phosphorylation levels of PLCγ2 following GPVI activation. In conclusion, Rac1 activity is required for both human and murine platelet activation in response to GPVI-ligands, but Rac1's mode of action differs between the two species.},
  language  = {en}
}