TY  - THES
A1  - Gehlen, Martin Ludwig
T1  - Kontrollierte Expansion von Insulin produzierenden Beta-Zellen des endokrinen Pankreas durch das Protein p8
T1  - Controlled expansion of insulin producing beta-cells of the endocrine pancreas by the p8 protein
N2  - p8 ist ein vor einigen Jahren erstmals im Zusammenhang mit Pankreatitis beschriebenes 80 Aminosäuren langes Protein, das im exokrinen Pankreas mit vermehrtem Zellwachstum assoziiert ist. Wir konnten p8 auch in beta-Zellen des endokrinen Pankreas nachweisen. Um Informationen über die subzelluläre Lokalisation zu erhalten, wurde ein Plasmid, das für ein Fusionsprotein aus p8 und GFP (grün fluoreszierendes Protein) kodiert, kloniert und in verschiedene Ziellinien transfiziert. Die Ergebnisse dieser Versuche sprechen dafür, dass p8 ein nukleäres Protein ist. Durch ein Deletionskonstrukt des Fusionsproteins wurde ein nukleäres Lokalisationssignal (NLS) am C-terminalen Ende des Proteins identifiziert. Um weitere Informationen über Funktion und Wirkungsweise von p8 zu erhalten, wurden induzierbar stabile INS-1-Zellen (beta-Zelllinie) etabliert. Stimulation dieser Zellen mit IPTG führte zu einer 5fachen Überexpression von p8. Die Zellzahl der p8-überexprimierenden Zellen und die der nicht-p8-überexprimierenden Zellen wurde zeitabhängig verglichen. Je nach Versuchsaufbau wurden nach 96 Stunden Zellwachstum unter p8-Überexpression 31% bis 37% mehr Zellen als in dem Vergleichskollektiv ohne p8-Überexpression ermittelt. Von Seufert et al. wurden in den Zellmedien der p8 überexprimierenden stabilen INS-1-Zellen kumulativ erhöhte Insulin-Spiegel gemessen. Dieses spricht dafür, dass Überexpression von p8 in beta-Zellen Proliferation ausloest, nicht aber zu einem Differenzierungsverlust führt. Unsere Untersuchungen nähren die Hoffnung, dass in Zukunft mit Hilfe von p8 Spender-beta-Zellen in vitro vermehrt und im Rahmen einer Zelltherapie einem Diabetiker transplantiert werden könnten.
N2  - p8 is a novel 80 amino acid protein which is strongly expressed in acute pancreatitis. There is an association with cellular growth in the exocrine pancreas. We were able to show existance of p8 in beta-cells of the endocrine pancreas. To gain information about the subcellular distribution we cloned a plasmid containing the DNA of a fusion protein of GFP (green fluorescence protein) and p8. This plasmid was transfected in several cell lines, giving evidence that p8 is a nuclear protein. Establishing deletion constructs of the fusion protein it was possible to show the existance of an c-terminal NLS (nuclear localization signal). We established an induceable double stable transfected beta-cell line (INS-1). IPTG induces a fivefold p8 overexpression. Cell counts were performed. After 96h of cellular growth we determined a 37% increase of cells grown under the influence of p8 overexpression compared to cells grown without p8 overexpression. Furthermore, we found significantly elevated insulin levels in the culture medium. In conclusion it was shown that p8 is a nuclear protein with c-terminal NLS. p8 induces beta-cell proliferation without leading to a lack of beta-cell differentiation.
KW  - Protein p8
KW  - Inseltransplantation
KW  - beta-Zellproliferation
KW  - p8 protein
KW  - islet transplantation
KW  - beta-cell proliferation
Y1  - 2005
U6  - http://nbn-resolving.de/urn/resolver.pl?urn:nbn:de:bvb:20-opus-12027
ER  -