TY  - THES
A1  - Hauck, Melanie
T1  - Bakterielle Expression von Hantavirusgenen
T1  - Bacterial expression of hantavirus genes
N2  - Hantaviren sind infektiöse Ursache des Hämorrhagischen Fiebers mit renalem Syndrom (HFRS), des Hanta Pulmonary Syndrome (HPS)und der Nephropathia epidemica (NE). Das hantavirale N-Protein (Nukleokapsidprotein), codiert durch das S-Segment, stellt sich als dabei als antigenetisches Hauptziel der humoralen Immunantwort dar. In der vorliegenden Arbeit wurde nach Anzucht der beiden Hantavirusstämme Puumala und Dobrava RNA des S-Segments extrahiert und durch RT-PCR in cDNA umgeschrieben und vervielfältigt. Die cDNA wurde anschließend in den pCR2.1-TOPO-Vektor (Fa. Invitrogen)kloniert und nachfolgend in den pRSETB Vektor (Fa. Invitrogen) umkloniert. Die beiden rekombinanten Plasmide pRSETBPuumalaN und pRSETBDobravaN wurden zur bakteriellen Expression der hantaviralen N-Proteine in kompetente Zellen gegeben. Nach Aufreinigung wurden die N-Proteine zur Antikörperproduktion durch Injektion in Kaninchen verbracht. Die dadurch erhaltenen polyklonalen Antikörper anti-PuumalaN-AK und anti-DobravaN-AK stehen für weitere Untersuchungen und Hantavirusforschung als molekulare Werkzeuge zu Verfügung.
N2  - Hantavirus is infectious cause for hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS), for the hanta pulmonary syndrome (HPS) and for nephropathia epidemica (NE).Hantaviral N-protein (nucleocapsidprotein) is the immunogen major topic for the humoral immune reaction. After culture of the hantavirus subtypes Puumala and Dobrava we extracted the viral RNA of the s-segment. By RT-PCR we received cDNA. The cDNA was cloned into the pCR2.1-TOPO-vector (firm Invitrogen) and after this we cloned the cDNA into the pRSETB-vector (Invitrogen). As the result we generated the two recombinat plasmides pRSETBPuumalaN and pRSETBDobravaN. For bacterial expression of the hantaviral N-proteins we transfered the both recombinant plasmids into competent bacterial cells. After up-clean the received N-proteins we injected them into rabbits and got after immunisation the polyclonal antibodies anti-PuumalaN and anti-DobravaN. This polyclonal antibodies against the hantaviral N-protein can be now used for further workings and molecular tools in hantavirus researches.
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Y1  - 2005
U6  - http://nbn-resolving.de/urn/resolver.pl?urn:nbn:de:bvb:20-opus-19097
ER  -