Refine
Is part of the Bibliography
- yes (156)
Year of publication
Document Type
- Doctoral Thesis (156) (remove)
Keywords
- Oxidativer Stress (16)
- DNS-Schädigung (11)
- genotoxicity (11)
- Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer (10)
- Mikrokerne (10)
- G-Protein gekoppelte Rezeptoren (9)
- micronuclei (9)
- GPCR (8)
- oxidative stress (8)
- Angiotensin II (7)
- Biomarker (7)
- DNA damage (7)
- Genotoxizität (7)
- Herzinsuffizienz (7)
- Adenosinrezeptor (6)
- FRET (6)
- Gentoxizität (6)
- Maus (6)
- Mutagenität (6)
- Aldosteron (5)
- Dimerisierung (5)
- Kleinkern (5)
- MAP-Kinase (5)
- Toxizität (5)
- biomarker (5)
- cAMP (5)
- genomic damage (5)
- Comet Assay (4)
- Cyclo-AMP (4)
- DNA-Schaden (4)
- Genomschaden (4)
- Herzhypertrophie (4)
- Inhibition (4)
- cardiac hypertrophy (4)
- toxicity (4)
- Adenosin (3)
- Adrenerger Rezeptor (3)
- Beta-Rezeptor (3)
- Biotransformation (3)
- Calcium (3)
- Chronophin (3)
- Dialyse (3)
- G-Protein (3)
- G-protein (3)
- Hypertonie (3)
- In vitro (3)
- Insulin (3)
- LC-MS (3)
- Leber (3)
- Magenchirurgie (3)
- Metabolismus (3)
- Mikrokern (3)
- Mikrokerntest (3)
- Muscarinrezeptor (3)
- NADPH-Oxidase (3)
- Nephrotoxizität (3)
- Nichtionisierende Strahlung (3)
- Niere (3)
- PDXP (3)
- Phosphatase (3)
- Phosphatasen (3)
- Phosphoglykolatphosphatase (3)
- Pneumolysin (3)
- Pyridoxalphosphat (3)
- Rezeptor (3)
- Signaltransduktion (3)
- bariatric surgery (3)
- carcinogenicity (3)
- heart failure (3)
- micronucleus test (3)
- mutagenicity (3)
- nephrotoxicity (3)
- Actin (2)
- Adipositas (2)
- Alpha-2-Rezeptor (2)
- Anthocyane (2)
- Apoptose (2)
- Apoptosis (2)
- Autoimmunerkrankung (2)
- BRET (2)
- Bakteriengift (2)
- Benfotiamin (2)
- Bestrahlung (2)
- Beta-1-Rezeptor (2)
- Brustkrebs (2)
- Carcinogenese (2)
- DNA Schaden (2)
- DNS-Schaden (2)
- DNS-Strangbruch (2)
- Dosis-Wirkungs-Beziehung (2)
- ERK1/2 (2)
- Fluoreszenz (2)
- Furan (2)
- Förster Resonanz Energie Transfer (2)
- G protein coupled receptor (2)
- G-Protein gekoppelter Rezeptor (2)
- HPLC-MS (2)
- Heart failure (2)
- Herz (2)
- Hirnhautentzündung (2)
- Huh6 (2)
- Hypertrophie (2)
- Hämatopoetische Stammzellen (2)
- Hämodialyse (2)
- Kanzerogenese (2)
- Kardiomyopathie (2)
- Kongestive Herzmuskelkrankheit (2)
- Lasiocarpin (2)
- Meningitis (2)
- Merkaptursäuren (2)
- Metabonomics (2)
- Micronuclei (2)
- Micronucleus (2)
- Mikroskopie (2)
- Noradrenalin (2)
- Paracetamol (2)
- Parathormon (2)
- Peptidtherapie (2)
- Pharmakokinetik (2)
- Phosducin (2)
- Pyrrolizidinalkaloide (2)
- Raf kinase inhibitor protein (2)
- Raf-Kinasen (2)
- Regulation (2)
- Risk Assessment (2)
- Sulforaphan (2)
- Terahertzbereich (2)
- Terahertzstrahlung (2)
- Toxicology (2)
- Toxikologie (2)
- Transgene Tiere (2)
- Zellkultur (2)
- Zellzyklus (2)
- adenosine receptor (2)
- bariatrische Chirurgie (2)
- beta-adrenerge Signalwege (2)
- cGMP (2)
- calcium (2)
- cancer (2)
- cell culture (2)
- comet assay (2)
- comet-assay (2)
- dialysis patients (2)
- estrogen (2)
- furan (2)
- hypertension (2)
- kidney (2)
- liver (2)
- mercapturic acids (2)
- metabonomics (2)
- non-ionizing radiation (2)
- oxidativer Stress (2)
- peripheral lymphocytes (2)
- pharmacokinetics (2)
- terahertz radiation (2)
- transgen (2)
- Östrogene (2)
- 1 (1)
- 1H-NMR-Spectroscopy (1)
- 2 (1)
- 3 (1)
- 3-pentafluoropropene (1)
- 3-tetrafluoropropene (1)
- 4-Aminobiphenyl (1)
- 4-aminobiphenyl (1)
- 4-dial (1)
- 7,8-Dihydroxyflavon (1)
- 7,8-dihydroxyflavone (1)
- 8-Oxo-2’-desoxyguanosin (1)
- 8-oxo-2'-deoxyguanosine (1)
- A2B adenosine receptor (1)
- A2BAR (1)
- AAF (1)
- ADHS (1)
- API-Massenspektrometrie (1)
- AUM (1)
- Acetaminophen (1)
- Acetylcysteinderivate (1)
- Acrylamid (1)
- Acrylamide (1)
- Actin cytoskeleton (1)
- Activation (1)
- Addition (1)
- Adenosine (1)
- Adenosine receptor (1)
- Adenosine receptors (1)
- Adenylatcyclaseassay (1)
- Adipositaschirurgie (1)
- Adrenalin (1)
- Adrenerger Neuronenblocker (1)
- Adrenergic Receptor (1)
- Adrenergic neurone blocking agent (1)
- Adrenergic receptor (1)
- Adrenergisches System (1)
- Adrenozeptor (1)
- Advanced glycosylation end products (1)
- Adverse Outcome Pathway (1)
- Adverse outcome pathway (AOP) (1)
- Aktionspotenzial (1)
- Aktivierung (1)
- Aldosteronantagonist (1)
- Alkylantien (1)
- Allosterie (1)
- Alternans (1)
- Alterung (1)
- Aneugene (1)
- Angewandte Toxikologie (1)
- Angiotensin (1)
- Angiotensin II Typ 1a-Rezeptor (1)
- Angiotensin-II-Blocker (1)
- Angst (1)
- Animal model (1)
- Antibodies (1)
- Antikörper (1)
- Antimutagen (1)
- Antioxidans (1)
- Anxiety (1)
- Arsen (1)
- Arzneimittel (1)
- Astrozyt (1)
- Atherosclerosis (1)
- Atherosklerose (1)
- Aufmerksamkeits-Defizit-Syndrom (1)
- Autofocus (1)
- Azole (1)
- Azoles (1)
- BG-1 Zellen (1)
- BG-1 cells (1)
- BMS-5 (1)
- Background DNA damage (1)
- Bacterial Toxins (1)
- Bacterial meningitis (1)
- Bakterielle Hirnhautentzündung (1)
- Bakterien (1)
- Bcl-2 (1)
- Beta- adrenergic receptors (1)
- Beta-1-receptor (1)
- Beta-Adrenergic Receptor (1)
- Beta-Adrenozeptor (1)
- Beta-Receptor subtypes (1)
- Beta-Rezeptor Subtypen (1)
- Beta-adrenerge Rezeptoren (1)
- Bilirubin (1)
- Bindungsassay (1)
- Bioluminescence resonance energy transfer (1)
- Biosensor (1)
- Biostatistik (1)
- Bisphenol A (1)
- Blutbildendes System (1)
- Blutgefäß (1)
- Blutstammzelle (1)
- Bombyx mori (1)
- BrdU (1)
- C1q/tumor necrosis factor-related proteins (1)
- CAMP production (1)
- CCT (1)
- CFC replacements (1)
- CFP (1)
- CHO-Zellen (1)
- CHO-cells (1)
- CMF-Therapie (1)
- CTRP (1)
- CXCR4 (1)
- CYP19 (1)
- CYP51 (1)
- Calcium-bindende Proteine (1)
- Calciumkanal (1)
- Carcinogen (1)
- Carcinogenität (1)
- Cardiomyocyte (1)
- Caseinkinase 2 (1)
- Caspase-1 (1)
- Caveolae (1)
- Celecoxib (1)
- Cell adhesion (1)
- Chemokine (1)
- Chemokine receptors (1)
- Chemometrie (1)
- Chemotherapie (1)
- Chlorfluorkohlenstoffe (1)
- Cholinesteraseinhibitor (1)
- Chronical renal failure (1)
- Clonidin (1)
- Coffein (1)
- Cofilin (1)
- Colon cancer (1)
- Comet assay (1)
- Comet-Assay (1)
- Cyclo-GMP (1)
- Cytochalasin-B micronucleus assay (1)
- Cytochrom P450 (1)
- Cytokine (1)
- Cytologie (1)
- DCM (1)
- DIPP2a (1)
- DIPP2a-Protein (1)
- DNA Damage (1)
- DNA adducts (1)
- DNA base excision repair (1)
- DNA-Addukte (1)
- DNA-Damage (1)
- DNA-Reparatur (1)
- DNA-Schäden (1)
- DNA-damage (1)
- DNS (1)
- DNS-Doppelstrangbruch (1)
- DNS-Reparatur (1)
- Datenanalyse (1)
- Depression (1)
- Di (1)
- Dialysepatienten (1)
- Dialysis (1)
- Diclofenac (1)
- Differenzierung (1)
- Differenzierungszustand (1)
- Dilatative Kardiomyopathie (1)
- Dilated cardiomyopathy (1)
- Diskriminanzanalyse (1)
- Dopamin-beta-Hydroxylase Promotor (1)
- Dose response relationships (1)
- Dualstere Liganden (1)
- Dualsteric Ligands (1)
- EAD (1)
- EGF-Rezeptor (1)
- EGF-receptor (1)
- ERK Dimerisierungsdefizienz (1)
- ERK-Kaskade (1)
- ERK-Monomer (1)
- ERK-cascade (1)
- ERK1/2 Dimerisierung (1)
- ERK1/2-Autophosphorylierung (1)
- ERK2d4 (1)
- ESDR (1)
- Ecdyson (1)
- Effekt-Modifizierung (1)
- Eierstockkrebs (1)
- Einwärtsgleichrichtung (1)
- Einzelzellgelelektrophorese (1)
- Elektrokardiogramm (1)
- Elektromagnetische Felder (1)
- Embryonalen Stammzellen (1)
- Embryonalentwicklung (1)
- Empfindlichkeit (1)
- Endokrinologie (1)
- Endothelzelle (1)
- Endozytose (1)
- Entzündung (1)
- Epac (1)
- Epigenetik (1)
- Erk1/2 (1)
- Ersatzstoff (1)
- Erythrozyt (1)
- Excitotoxicity (1)
- Expositionsmarker (1)
- Extrakorporale Dialyse (1)
- FACS (1)
- FCKW-Ersatzstoffe (1)
- FCS (1)
- FHK (1)
- FRAP (1)
- FRET sensors (1)
- Fettsucht (1)
- Fibromyalgie (1)
- Fibrose (1)
- Fl (1)
- FlAsH (1)
- Flugzeitmassenspektrometrie (1)
- Fluorescence (1)
- Fluorescence Correlation Spectroscopy (1)
- Fluorescence Microscopy (1)
- Fluorescence-resonance-energy-transfer (1)
- Fluoreszenz <Motiv> (1)
- Fluoreszenzkorrelationsspektroskopie (1)
- Fluoreszenzmikroskopie (1)
- Fluorkohlenwasserstoffe (1)
- Fluoxetin (1)
- Fluoxetine (1)
- Folsäure (1)
- Frank-Starling-Gesetz (1)
- Fumonisin B1 (1)
- Fumonisine (1)
- Functional analyses (1)
- Fungizid (1)
- Förster Resonance Energy Transfer (1)
- G Protein (1)
- G Protein-Coupled Receptor (1)
- G beta gamma (1)
- G protein-coupled receptor kinase (1)
- G protein-coupled receptor kinase 2 (GRK2) (1)
- G protein-coupled receptors (1)
- G protein-gekoppelte Rezeptor Kinase 2 (GRK2) (1)
- G-Protein-gekoppelter-Rezeptor (1)
- G-Proteine (1)
- G-protein coupled receptor (1)
- G-protein-coupled receptors (1)
- GC-MS (1)
- GC/MS (1)
- GIRK (1)
- GPCR dimerisation (1)
- GPCR signaling (1)
- GTP-bindende Proteine (1)
- Gbetagamma-Untereinheiten (1)
- Gbetagamma-subunits (1)
- Gebärmutterhalskrebs (1)
- Gefäßentwicklung (1)
- Gegensatz (1)
- Genanalyse (1)
- Genetic instability (1)
- Genmutation (1)
- Genomische Instabilität (1)
- Genotoxicitiy (1)
- Genotoxicity (1)
- Genotyp (1)
- Genregulation (1)
- Gentoxikologie (1)
- Gi/o (1)
- Gilbert Syndrom (1)
- Gilbert´s Syndrome (1)
- Glatte Muskulatur (1)
- Glioblastom (1)
- Glucuronidation (1)
- Glukuronidierung (1)
- Glutathion S-Konjugat (1)
- Glycerin-3-phosphat (1)
- Glycerinphosphate (1)
- Gq-Protein (1)
- Grün fluoreszierendes Protein (1)
- Guanin Nukleotid Austauschfaktor (1)
- Guaninnucleotid-Austauschfaktoren (1)
- Guanylatcyclase (1)
- HAD-Phosphatasen (1)
- HCM (1)
- HCN channel (1)
- HCN-Kanal (1)
- HFC245fa (1)
- HIPEC therapy (1)
- Hals-Nasen-Ohren-Tumor (1)
- Harn (1)
- Hauptkomponentenanalyse (1)
- Hemmung der Proliferation schnell wachsender Krebszellen (1)
- Herzfrequenz (1)
- Herzmuskelzelle (1)
- Herzrhythmusstörung (1)
- Hietzeschockprotein (1)
- High-thropughput screening (1)
- Hintergrund-DNA-Schaden (1)
- Hochdurchsatz-Screening (1)
- Homocystein (1)
- Hormone (1)
- Hsp90 (1)
- Human (1)
- Humane Hämatopoetische Stammzellen (1)
- Hydroxylradikal (1)
- Hyperinsulinämie (1)
- Hypernephrom (1)
- Hypertension (1)
- Hyperthermie (1)
- Hypertrophische Herzmuskelkrankheit (1)
- Häm (1)
- Hämatopoese (1)
- Hämodiafiltration (1)
- Hämoglobinaddukte (1)
- I1 Imidazolin Bindungsstelle (1)
- I1 imidazoline binding site (1)
- Immunkardiomyopathie (1)
- Immunoblot (1)
- In vitro testing (1)
- In vivo (1)
- In-silico Modell (1)
- Inflammation (1)
- Inhalation (1)
- Inhibitor (1)
- Interferenz (1)
- Inward Rectification (1)
- Janus-Aktivität (1)
- Kaffee (1)
- Kalzium (1)
- Kandidatengene (1)
- Kaninchen (1)
- Kardiomoyzyten (1)
- Kardiomyozyt (1)
- Kardiomyozyten (1)
- Karzinogenese (1)
- Katecholamine (1)
- Kinase signaling (1)
- Kinder (1)
- Klassifizierung (1)
- Klastogene (1)
- Knockout (1)
- Kognitive Beeinträchtigung (1)
- Kombination (1)
- Konformationsänderung (1)
- Kopf-Hals-Tumor (1)
- Krebs (1)
- L5178Y cells (1)
- L5178Y-Zellen (1)
- LC-MS/MS (1)
- LIMK (1)
- LPS (1)
- Lebendzellmikroskopie (1)
- Ligand <Biochemie> (1)
- Liganden (1)
- Lipidom (1)
- Lipidomics (1)
- Liver (1)
- Lymphozyt (1)
- Lymphozyten (1)
- Lysosom (1)
- MAO-Hemmer (1)
- MAP (1)
- MAP-kinase (1)
- MDA-MB-231 breast cancer cells (1)
- MDA-MB-231-Brustkrebszellen (1)
- MIBG (1)
- MMR-Reparatur (1)
- Magenkrebs (1)
- Mammakarzinom (1)
- Map-kinase (1)
- Massenspektrometrie (1)
- Matrix-Metalloprotease (1)
- Matrix-Metalloproteinase (1)
- Mauslymphomtest (1)
- Mauslymphomzellen (1)
- Mauslymphomzellen L5178Y (1)
- Melanoma (1)
- Melanomzelllinien (1)
- Membranrezeptor (1)
- Merkaptolaktat (1)
- Merkaptursäure (1)
- Metabolism (1)
- Metabolite von Morphin (1)
- Metabolites of morphine (1)
- Metabolom (1)
- Metabolomics (1)
- Metabonomix (1)
- Methode der partiellen kleinsten Quadrate (1)
- Methylierung (1)
- Methylphenidat (1)
- Methymethansulfonat (1)
- Microscopy (1)
- Mikrokernfrequenz (1)
- Mikrokernfrequenzanalyse (1)
- Mikronukleus-Assay (1)
- Mineralokortikoidrezeptor (1)
- Mobiles Endgerät (1)
- Mobilfunk (1)
- Mobilfunkstrahlung (1)
- Monoaminoxidase (1)
- Morphin (1)
- Multivariate Analyse (1)
- Mundschleimhaut (1)
- Mundschleimhautzellen (1)
- Mutagen (1)
- Mutagenitätstest (1)
- Mutation (1)
- Mykotoxin (1)
- Myocard (1)
- Myofilament (1)
- Myosin (1)
- NADPH oxidase (1)
- NHERF (1)
- NOF (1)
- Na/H-Austauscher (1)
- Na/H-exchanger (1)
- Natrium-Calcium-Austauscher (1)
- Nebenniere (1)
- Nephrotoxicity (1)
- Nervennetz (1)
- Nervenzelle (1)
- Neuronale (1)
- Niereninsuffizienz (1)
- Nierenschädigung (1)
- Nierenschädigungsmarker (1)
- Nierenzellkarzinom (1)
- Nitrosativer Stress (1)
- No:cGMP-Signalling (1)
- No:cGMP-Signalweg (1)
- Nrf 2 (1)
- Opiatrezeptor (1)
- Ortspezifische Mutagenese (1)
- Oxidative Stress (1)
- PDE (1)
- PDE-Hemmung (1)
- PLCβ3 (1)
- PLP (1)
- PMCA (1)
- PTH1R (1)
- Paclitaxel (1)
- Partial Agonists (1)
- Partialagonismus (1)
- Passivrauchen (1)
- Patulin (1)
- Peptides (1)
- Perforine (1)
- PhD thesis pharmacology (1)
- Pharmakogenetik (1)
- Pharmakologie (1)
- Phenobarbital (1)
- Phosducin-like Proteine (1)
- Phosducin-ähnliches protein (PhLP) (1)
- Phosphodiesterase (1)
- Phosphodiesterasen (1)
- Phosphoglykolat (1)
- Phosphoglykolat-Phosphatase (1)
- Phospholipase C (1)
- Phosphorylierung (1)
- Physiologie (1)
- Phytohormone (1)
- Phänotyp (1)
- Phäochromozytomzellen (1)
- Plasmamembran-Kalzium-ATPase (1)
- Plazenta (1)
- Pore (1)
- Pore formation (1)
- Pore-formation (1)
- Porenbildung (1)
- Propenderivate (1)
- Proteasom (1)
- Protein (1)
- Protein Folding (1)
- Protein Interaction (1)
- Protein-Protein-Wechselwirkung (1)
- Proteinaddukte (1)
- Proteinbindung (1)
- Proteinfaltung (1)
- Proteinkinase A (1)
- Proteinkinase C (1)
- Proteinkinase CK2 (1)
- Proteintyrosinphosphatase (1)
- Proteolyse (1)
- Protonen-NMR-Spektroskopie (1)
- Pyridoxal phosphate phosphatase (1)
- Pyridoxalphosphat Phosphatase (1)
- QIVIVE (1)
- RAMP (1)
- RGS2 (1)
- RKIP (1)
- RNA degradation (1)
- RNS-Interferenz (1)
- Radiosensibilisierung (1)
- Raf Kinase Inhibitor Protein (RKIP) (1)
- Raf1 (1)
- Raucher (1)
- ReAsH (1)
- Reaktive Sauerstoffspezies (1)
- Reaktive Zwischenstufe (1)
- Real-Time quantitative PCR (1)
- Receptor (1)
- Receptor dynamics (1)
- Refraktärzeit (1)
- Regulator of G protein signaling 2 (1)
- Renin-Angiotensin-Aldosteron-System (1)
- Renin-Angiotensin-System (1)
- Resistenzentwicklung (1)
- Resveratrol (1)
- Retinales S-Antigen (1)
- Rgs2 (1)
- Rho-GTPasen (1)
- Rho-Proteine (1)
- Riddelliin (1)
- Risikoanalyse (1)
- Risikobewertung (1)
- SUMO (1)
- Schwesterchromatidenaustausche (1)
- Sekunde (1)
- Selenmangel (1)
- Senecionin (1)
- Seneciphyllin (1)
- Sensor (1)
- Signal transduction (1)
- Signalkette (1)
- Small RNA (1)
- Species Differences (1)
- Spermatogenesis (1)
- Speziesunterschiede (1)
- Spironolacton (1)
- Src (1)
- Statin (1)
- Stickstoffmonoxid (1)
- Stickstoffoxidsynthase (1)
- Stoffwechsel (1)
- Strahlentherapie (1)
- Streptococcus pneumoniae (1)
- Stress (1)
- Substratspezifitätsschleife (1)
- Sudden Cardiac Death (1)
- Sulfonylharnstoffe (1)
- Sulforaphane (1)
- Sympathikus (1)
- Synergie (1)
- Synergismus (1)
- Systembiologie (1)
- Säugerzellen (1)
- Säugetiere (1)
- TCP-1 alpha (1)
- TIRF (1)
- Tabakrauch (1)
- Tetrachlormethan (1)
- Tetracystein-Motive (1)
- Tetracystein-Motivee (1)
- Thebain (1)
- Thrombin (1)
- Tiermodell (1)
- Time-of-flight (1)
- Toxicokinetics (1)
- Toxikokinetik (1)
- Toxin (1)
- Toxizitätstest (1)
- Transgene Mäuse (1)
- Transgenes Mausmodell (1)
- Transgenic mice (1)
- Transkription (1)
- Transkriptionsfaktoren (1)
- Trifluorpropionsäure (1)
- Troponin (1)
- Tumorpromotion (1)
- Tumorzelle (1)
- Tumorzellproliferation (1)
- Tyrosin (1)
- Tyrosin phosphatase (1)
- UCP2 (1)
- UCP2-Protein (1)
- UGT1A1 (1)
- Ubiquitin (1)
- Urämische Toxine (1)
- VASP (1)
- Validierung (1)
- Vitamin B12 (1)
- Vitamin B6 (1)
- Vitamin B6 Metabolismus (1)
- Vitamin E Mangel (1)
- Vitamin-B6-Stoffwechsel (1)
- WD 40 Repeat Proteins (1)
- Wachstum (1)
- Wirkstoff-Rezeptor-Bindung (1)
- YFP (1)
- Zell-Adhäsion (1)
- Zelladhäsion (1)
- Zelldifferenzierung (1)
- Zelle (1)
- Zelllinie (1)
- Zellproliferationssteigerung (1)
- Zelltransport (1)
- Zellzykluskontrolle (1)
- Zigarettenrauch (1)
- Zyklopeptid (1)
- adenosine (1)
- adrenal gland (1)
- adrenerg (1)
- adrenerge Rezeptoren (1)
- adrenergic (1)
- adrenergic receptors (1)
- adrenoceptor (1)
- adult ADHD (1)
- advanced glycosylation end product (1)
- aldosterone (1)
- alkylating agent (1)
- alkylating agents (1)
- allosteric modulation (1)
- alpha2 (1)
- alpha2-KO Maus (1)
- alpha2-KO mouse (1)
- alpha2-Rezeptor (1)
- alpha2-adrenerge Rezeptoren (1)
- alpha2-adrenergic receptors (1)
- alpha2-receptor (1)
- aneugens (1)
- angiotensin II (1)
- angiotensin II type 1a receptor (1)
- anthocyanins (1)
- antimutagenicity (1)
- apoptosis (1)
- arsenite (1)
- atopische Erkrankungen (1)
- autophosphorylation of ERK1/2 (1)
- benfotiamine (1)
- beta-adrenerge Rezeptoren (1)
- beta-adrenergic signal transduction (1)
- biosensor (1)
- biotransformation (1)
- bisphenol a (1)
- bombyx mori (1)
- buccal mucosa (1)
- caffeine (1)
- calcium channel (1)
- carcinogenesis (1)
- cardiomyocyt (1)
- cardiomyopathy (1)
- casein kinase 2 (1)
- catecholamines (1)
- caveolae (1)
- cell adhesion (1)
- cell-cycle (1)
- cellular-trafficking (1)
- checkpoints (1)
- children (1)
- cholinesterase (1)
- cholinesterase inhibitors (1)
- chromaffin granulas (1)
- chromaffine Granulas (1)
- chromosomal damage (1)
- chronical stress (1)
- chronischer Stress (1)
- cis-2-Buten-1 (1)
- cisplatin (1)
- classification (1)
- clastogens (1)
- clonidine (1)
- coffee (1)
- comet assay analysis (1)
- compartments (1)
- control of the cell cycle (1)
- coupled (1)
- cyclo-AMP (1)
- cytochrome p450 (1)
- cytogenetic effects (1)
- cytokinesis-block micronucleus assay (1)
- dialysis (1)
- differentiation (1)
- differentiation status (1)
- dna damage (1)
- dna strand break (1)
- dopamine-beta-hydroxylase-promotor (1)
- dose response (1)
- dualsteric ligands (1)
- ecdysone (1)
- embryonic stem cell (1)
- end-stage renal disease (1)
- endothelial cells (1)
- environm. tobacco smoke (1)
- epigenetics (1)
- estrogens (1)
- etox database (1)
- fibrosis (1)
- fluorescence (1)
- fluorescence resonance energy transfer (1)
- fluorocarbons (1)
- folic acid (1)
- fumonisin B1 (1)
- genetischer Schadens (1)
- genomprotektiv (1)
- genotoxic agents (1)
- genotoxisch (1)
- genotoxische Agenzien (1)
- genotyping (1)
- glutathion S-conjugate (1)
- gprotein (1)
- growth (1)
- guanine nucleotide exchange factor (1)
- halo olefines (1)
- head and neck cancer (1)
- heart (1)
- heart rate (1)
- heat shock protein (1)
- heme (1)
- hemodiafiltration (1)
- hemodialysis (1)
- hemodialysis patients (1)
- hemoglobin adducts (1)
- homocysteine (1)
- huh6 (1)
- human hematopoietic stem cells (1)
- hydrofluorocarbons (1)
- hypertrophy (1)
- idiosyncratic drug toxicity (1)
- idiosynkratische Arzneistofftoxizität (1)
- in vitro (1)
- in-silico model (1)
- inducible transgene (1)
- induzierbares Transgen (1)
- induzierte Mutation (1)
- induzierte Phosphatasen MKP-1 und MKP-2 (1)
- inhalation (1)
- inhibitor (1)
- inhibitors (1)
- intracellular calcium release (1)
- irradiation (1)
- kardiale Hypertrophie (1)
- lasiocarpine (1)
- ligandenselektive Konformationen (1)
- lignaselective conformations (1)
- lysosomaler Overload (1)
- lösliche Guanylylcyclase (1)
- mammalian cells (1)
- mao-inhibiters (1)
- markers of exposure (1)
- mass spectrometry (1)
- mercaptolactic acid (1)
- mercapturic acid (1)
- meta-Iodbenzylguanidin (1)
- meta-iodobenzylguanidine (1)
- metabolism (1)
- metabolites (1)
- metabolomics (1)
- methyl methanesulfonate (1)
- methylation (1)
- miR-21 (1)
- microRNA-21 (1)
- micronucleus (1)
- micronucleus assay (1)
- micronucleus frequency (1)
- micronucleus- assay (1)
- mismatch repair (1)
- mitotic catastrophe (1)
- mixture models (1)
- mobil phone radiation (1)
- monoamine oxidase (1)
- mouse (1)
- mouse lymphoma cells (1)
- multivariate analysis (1)
- muscarinic acetylcholine receptor (1)
- muscarinic aceylcholine receptor (1)
- mycotoxin (1)
- myocardium (1)
- myosin (1)
- neuronal (1)
- nicht additive Effekte (1)
- nitric oxide (1)
- nitrosative stress (1)
- non-additive effects (1)
- noradrenaline (1)
- obesity (1)
- oligomerization (1)
- opioid receptor (1)
- ovarian cancer (1)
- oxidative Stressmarker (1)
- oxidative stress marker (1)
- p53 (1)
- paclitaxel (1)
- parathyroid hormone (1)
- passive smoking (1)
- periphere Lymphozyten (1)
- pharmacogenetics (1)
- pharmacology (1)
- phenobarbitale (1)
- phenotyping (1)
- pheochromocytoma cells (1)
- phopohrylierungsdefizient (1)
- phosducin (1)
- phosducin-like protein (PhLP) (1)
- phosphoglycolatephosphatase (1)
- phytohormones (1)
- placenta (1)
- plasma membrane calcium ATPase (1)
- plötzlicher Herztod (1)
- pms2 (1)
- posttranslational modification (1)
- posttranslationale Modifikation (1)
- proliferation (1)
- protein adducts (1)
- psychosocial stress (1)
- psychosozialer Stress (1)
- pyridoxal phosphate (1)
- radiation (1)
- radiofrequency radiation (1)
- radiosensibilisation (1)
- rats (1)
- reactive metabolites (1)
- reaktive Metabolite (1)
- reaktive Sauerstoffspezies (1)
- receptor (1)
- receptors (1)
- red blood cells (1)
- reduction of ERK1/2 phosphorylation (1)
- reduction of cells proliferation (1)
- renal toxicity (1)
- repeated dose (1)
- resistance (1)
- resveratrol (1)
- rezeptorvermittelte Endozytose (1)
- sGC (1)
- second extracellular loop (1)
- senecionine (1)
- seneciphylline (1)
- sensor (1)
- signal transduction (1)
- single-molecule imaging (1)
- sister chromatid exch. (1)
- soluble guanylyl cyclase (1)
- stabile Transfektion (1)
- stable transfection (1)
- sublinear (1)
- sulfonylurea (1)
- synergism (1)
- terminale Niereninsuffizienz (1)
- tetrafluoropropene (1)
- thrombin (1)
- tierversuchsfrei (1)
- toxicity testing (1)
- trans-1 (1)
- transcription (1)
- transcription factors (1)
- transgene Ratten (1)
- transgene rats (1)
- transgenic (1)
- transgenic mice (1)
- trifluoropropionic acid (1)
- tumourpromotion (1)
- tyrosine phosphatase (1)
- ubiquitin (1)
- uremic toxins (1)
- vascular smooth muscle cells (1)
- vasculogenesis (1)
- vaskuläre glatte Muskelzellen (1)
- vav2 (1)
- vessel (1)
- vitamin b12 (1)
- zweite extrazelluläre Domäne (1)
- Östrogen (1)
- ß-adrenerge Rezeptoren (1)
- ß-adrenerge Signaltransduktion (1)
- ß-adrenergic Receptors (1)
- γ-H2AX (1)
Institute
- Institut für Pharmakologie und Toxikologie (156) (remove)
Sonstige beteiligte Institutionen
- Institut für Biopsychologie, Universität Dresden (1)
- Leibniz-Institut für Analytische Wissenschaften - ISAS - e.V. (1)
- Max Delbrück Center for Molecular Medicine (1)
- Max-Delbrück-Center für molekulare Medizin, Berlin (1)
- Pharmakologie, Universität Bonn (1)
- Pharmazie, Universität Mailand (1)
- Universitätsklinikum Düsseldorf, Institut für Toxikologie (1)
Soluble guanylyl cyclase (sGC) is the best established receptor for nitric oxide (NO) and regulates a great number of important physiological functions. Surprisingly, despite the wellappreciated roles of this enzyme in regulation of vascular tone, smooth muscle cell proliferation, platelet aggregation, renal sodium secretion, synaptic plasticity, and other functions, extremely little is known about the regulation of sGC activity and protein levels. To date, the only well-proven physiologically relevant sGC regulator is NO. In the present study, some additional possibilities for sGC regulation were shown. Firstly, we evaluated the ability of different NO donors to stimulate sGC. Significant differences in the sGC stimulation by SNP and DEA/NO were found. DEA/NO stimulated sGC much stronger than did SNP. Interestingly, no correlation between the sGC protein and maximal activity distribution was found in rat brain regions tested, suggesting the existence of some additional regulatory mechanisms for sGC. The failure of SNP to stimulate sGC maximally might be one of the reasons why the lack of correlation between the distribution of sGC activity and proteins in brain was not detected earlier. Prolonged exposure of endothelial cells to NO donors produced desensitization of the cGMP response. This desensitization cannot be explained by increased PDE activity, since PDE inhibitors were not able to prevent the NO donor-induced decrease of the maximal cGMP response in endothelial cells. The failure of SH-reducing agents to improve the cGMP response after its desensitization by NO suggests that a SH-independent mechanism mediates NO effects. Demonstration that the potency of the recently described activator of oxidized (heme-free) sGC, BAY58-2667, to stimulate sGC increases after prolonged exposure of the cells to an NO donor, DETA/NO, suggests that oxidation of heme may be a reason for NOinduced desensitization of sGC and decrease in sGC protein level. Indeed, the well-known heme-oxidizing agent ODQ produces a dramatic decrease in sGC protein levels in endothelial cells and BAY58-2667 prevents this effect. Although the mechanism of sGC activation and stabilization by BAY58-2667 is unknown, this substance is an interesting candidate to modulate sGC under conditions where sGC heme iron is oxidized. Very little is known about regulation of sGC by intracellular localization or translocation between different intracellular compartments. In the present study, an increase in sGC sensitivity to NO under membrane association was demonstrated. Treatment of isolated lung with VEGF markedly increased sGC in membrane fractions of endothelial cells. Failure of VEGF to stimulate sGC membrane association in cultured endothelial cells allows us to propose a complex mechanism of regulation of sGC membrane association and/or a transient character of sGC membrane attachment. A very likely mechanism for the attachment of sGC to membranes is via sGCinteracting proteins. These proteins may participate also in other aspects of sGC regulation. The role of the recently described sGC interaction partner, Hsp90, was investigated. Shortterm treatment of endothelial cells with an Hsp90 inhibitor does not affect NO donor or calcium ionophore-stimulated cGMP accumulation in the cells. However, inhibition of Hsp90 results in a rapid and dramatic decrease in sGC protein levels in endothelial cells. These effects were unrelated to changes in sGC transcription, since inhibition of transcription had much slower effect on sGC protein levels. In contrast, inhibitors of proteasomes abolished the reduction in sGC protein levels produced by an Hsp90 inhibitor, suggesting involvement of proteolytic degradation of sGC proteins during inhibition of Hsp90. All these data together suggest that Hsp90 is required to maintain mature sGC proteins. In conclusion, in the present study it was demonstrated that multiple mechanisms are involved in the regulation of sGC activity and its sensitivity to NO. Oxidation of sGC heme by NO seems to be one of the mechanisms for negative regulation of sGC in the presence of high or prolonged stimulation with NO. Another possible means of regulating sGC sensitivity to NO is via the intracellular translocation of the enzyme. It has been also demonstrated here that attachment of sGC to the membrane fraction results in an apparent increase in the enzyme sensitivity to NO. Additionally, Hsp90 was required to maintain sGC protein in endothelial and other cell types. However, we could not find any acute affect of Hsp90 on sGC activity, as reported recently. All these findings demonstrate that the regulation of sGC activity and protein level is a much more complex process than had been assumed earlier.
Die Gruppe der adrenergen Rezeptoren (AR) umfasst neun Rezeptoren (3 alpha1-, 3 alpha2-, 3 beta-AR), die alle durch die physiologischen Liganden Adrenalin und Noradrenalin aktiviert werden können. Eine Subgruppe der AR bilden die drei alpha2-AR alpha2A, alpha2B und alpha2C. Sie können prä- oder postsynaptisch lokalisiert sein. Präsynaptisch lokalisierte alpha2-AR hemmen die Transmitterfreisetzung im Sinne einer negativen Rückkopplung. Die Hauptrolle bei der präsynaptischen Hemmung der Transmitterfreisetzung spielen alpha2-AR vom Subtyp alpha2A. Es lagen zu Beginn dieser Arbeit auch Hinweise vor, daß noch weitere alpha2-Rezeptorsubtypen an dieser Funktion beteiligt sind. Eine eindeutige Zuordnung dieser alpha2-AR zu den Subtypen alpha2B oder alpha2C gelang aber bisher nicht. In dieser Arbeit sollte deshalb die Frage beantwortet werden, welche alpha2-AR neben dem alpha2A-AR an der präsynaptischen Hemmung der Transmitterfreisetzung im zentralen Nervensystem beteiligt sind. Zur Subtypunterscheidung wurden "knockout"-Mäuse verwendet, die nur einen oder zwei alpha2-Rezeptorsubtypen exprimierten. Gehirnschnitte aus dem Neokortex und den Basalganglien dieser Mauslinien wurden mit radoaktiv markiertem Noradrenalin bzw. Dopamin inkubiert. Anschließend wurde in Transmitterfreisetzungsexperimenten mit den so behandelten Gehirnschnitten Konzentrations-Wirkungskurven mit verschiedenen Liganden erstellt. Auf diese Weise konnte gezeigt werden, daß neben den alpha2A-AR auch alpha2C-AR präsynaptisch die Transmitterfreisetzung von Noradrenalin und Dopamin hemmen. In einem weiteren Schritt wurde die Aktivierungs- und Deaktivierungskinetik der alpha2A- und alpha2C-AR im heterologen Expressionssystem untersucht. Hierzu wurden stabile HEK293-Zellinien generiert, die entweder alpha2A- oder alpha2C-AR unterschiedlich stark exprimierten. Diese Zellinien wurden transient mit GIRK-Kanälen transfiziert, um die durch Stimulation mit Noradrenalin resultierenden Kaliumströme mit der "patch-clamp"-Technik zu messen. Dabei ergab sich kein signifikanter Unterschied zwischen alpha2A- und alpha2C-AR bezüglich der Aktivierungskinetik. Alpha2C-AR deaktivierten jedoch deutlich langsamer als alpha2A-AR. Diese Befunde belegen, daß zwei der drei alpha2-AR-Subtypen, alpha2A und alpha2C, als präsynaptische Autorezeptoren (Noradrenalin) bzw. Heterorezeptoren (Dopamin) die Neurotransmission modulieren. Dies könnte in der Zukunft für die Entwicklung neuer, subtypspezifischer Pharmaka von großer Bedeutung sein.
Ergebnisse vieler epidemiologischer Studien über die Risikoabschätzungen von Tumoren hormonabhängiger Gewebe legen einen deutlichen Zusammenhang zwischen den Hormonen und dem Auftreten dieser Tumoren nahe. Dabei wird der zellproliferationssteigernde Effekt der Hormone im Rahmen des Mehrstufenkonzeptes der Kanzerogenese meist als Promotionsfaktor beschrieben. In der vorliegenden Arbeit soll gezeigt werden, dass die hormonelle Induktion einer erhöhten Zellteilungsrate auch primär zu einer genetischen Instabilität beiträgt, mit dem Ziel einen weiteren Mechanismus in der Pathogenese hormonabhängiger Tumoren aufzuklären. Die östrogenrezeptorpositive Ovarialtumorzellinie BG-1 und die rezeptornegativen UCI-107 Zellen wurden mit 17-ß Östradiol behandelt und anschließend mit Hilfe des Mikrokerntests auf chromosomale Schäden untersucht. Die Bestimmung der Mikrokernrate bei den östrogensensitiven BG-1 Zellen zeigte, dass mit steigender Proliferationsinduktion auch die Mikrokernfrequenz konzentrationsabhängig erhöht war. Bei der Behandlung der BG-1 Zellen mit 17-ß Östradiol in Kombination mit dem spezifischen Östrogenrezeptorantagonisten 4- Hydroxytamoxifen wurde die östradiolinduzierte rezeptorabhängige Proliferationsstimulation durch Hydroxytamoxifen gehemmt. Parallel dazu sank auch die Mikrokernrate. Bei vergleichbaren Versuchen mit der östrogeninsensitiven UCI-107 Zellinie, bei der keine Effekte auf die Proliferation bei Behandlung der Zellen mit 17-ß Östradiol alleine sowie in Kombination mit 4- Hydroxytamoxifen detektiert werden konnte, wurde auch keine Mikrokerninduktion beobachtet. Eine erhöhte Mikrokernfrequenz konnte wiederum ausschließlich in den östradiolstimulierten BG-1 Zellen festgestellt werden, als durch den Einsatz des Zytokineseinhibitors Cytochalasin B die Auswertung der Mikrokerne auf jene Zellen normiert wurde, die genau eine Zellteilung durchgeführt hatten. Die Ergebnisse machten deutlich, dass die östradiolstimulierten Zellen auf Grund der beschleunigten Proliferation eine „andere Art von Zellteilung“ durchführen. In einem weiteren Abschnitt der Arbeit wurde der Einfluss der Östradiolstimulierung auf den Zellzyklus untersucht. Mittels eines FACScans konnten die prozentualen Zellzyklusphasenanteile (G1/ G0-, S- und G2/ M- Phase) der BG-1 Zellen zu verschiedenen Zeiten des Wachstums bestimmt werden. Zum Beispiel war der Anteil an Zellen der östradiolstimulierten Zellpopulation in der G2/ M Phase durchgehend um 6-8 % geringer gegenüber dem Anteil an Zellen, die mit Lösungsmittel behandelt wurden. Möglicherweise ist dies ein Erklärungsansatz für das vermehrte Auftreten von Mikrokernen bei Östradiolstimulierung, da bekannt ist, dass es in der G2/ M-Phase einen wichtigen Kontrollpunkt innerhalb des Zellzyklus zur Detektion und Reparatur chromosomaler Schäden gibt. Bei Berechnung der Zellzyklusphasenzeiten ergab sich ebenso in der G2/M Phase eine deutlich verkürzte Verweildauer der östradiol-behandelten BG-1 Zellen. Zusammengefaßt leitet sich die Hypothese ab: „Die Zellen werden auf Grund der hormonellen Proliferationsstimulierung durch den Zellzyklus „gejagt“, demzufolge werden wichtige „Checkpoints“ im Zellzyklus überlaufen, wodurch eine genetische Instabilität entstehen.kann“.
Zusammenfassung Systeme zur induzierbaren Transgenexpression sind wichtige Werkzeuge, um die Funktion einzelner Gene in vitro und in vivo zu untersuchen. Sie bestehen aus drei Grundkomponenten, einem zu regulierenden Zielgen, einem "Schalter" und einem Liganden, der diesen Schalter bedient. In dieser Arbeit wurden Untersuchungen am Ecdysonsystem durchgeführt, das als Schalter den Insektensteroidhormonrezeptor für das Verpuppungshormon Ecdyson verwendet. Zunächst wurde ein neuer Rezeptor mit der Ligandenbindedomäne des Ecdysonrezeptors (EcR) des Seidenspinners Bombyx mori konstruiert, dessen Eigenschaften in der Zellkultur mit einem DrosophilaEcR-Konstrukt, das für mammalische Expression optimiert ist, verglichen wurden. Mit dem BombyxEcR konnte die Transgenexpression durch den nichtsteroidalen Liganden Tebufenozid gesteuert werden, was beim DrosophilaEcR nicht möglich war. Damit ist man in diesem Expressionssystem nicht wie beim DrosophilaEcR auf teure steroidale Liganden wie Ponasteron angewiesen. Außerdem mußte beim BombyxEcR der Heterodimerisierungspartner RXR nicht kotransfiziert werden. In Bezug auf erreichbaren Induktionsfaktor und Kinetik der Genexpression zeigten sich für die beiden Systeme vergleichbare Ergebnisse. Weiterhin wurden durch Pronukleusinjektion transgene Mäuse erzeugt, die den BombyxEcR unter einem herzspezifischen Promotor (aMHC) exprimieren. Als Zielgen wurde die b2a-Untereinheit des L-Typ-Calciumkanals eingebracht, die mit dem neuen Schaltsystem herzspezifisch gesteuert werden sollte. Die Bioverfügbarkeit des Agonisten Tebufenozid nach intraperitonealer Injektion wurde in einem in-vitro Assay in HEK293-Zellen überprüft. Es ergaben sich hinreichende Wirkstoffspiegel im Serum der Mäuse, um das Reportergen zu induzieren. Auch wenn bei der transgenen Maus nach der Induktion mit Tebufenozid kein immunologischer Nachweis erhöhter Expression der b2a-Untereinheit gelang,konnte doch in Herzkatheteruntersuchungen eine veränderte Herzfunktion nachgewiesen werden. Bei transgenen Mäusen führte die intraperitoneale Applikation von Tebufenozid für bis zu sieben Tage zu einem signifikanten Anstieg des systolischen Blutdrucks und der maximalen linksventrikulären Kontraktionsgeschwindigkeit, der bei nicht-transgenen Kontrolltieren nicht beobachtet wurde. Diese Befunde deuten erstmals in vivo darauf hin, daß die b2a–Untereinheit des L-Typ-Calciumkanals am Herzen eine positiv inotrope Wirkung vermitteln kann. Systeme zur induzierbaren Genexpression müssen weiterentwickelt werden, um die Ideale der präzisen Steuerung ohne Nebenwirkungen sowohl für die Grundlagenforschung als auch für eine in weiterer Zukunft liegende Verwendung in der Gentherapie zu erreichen.
Phytohormone, insbesondere solche mit östrogenem Potential werden heute vermehrt in der postklimakterischen Hormonersatztherapie als natürliche Alternative zu Designeröstrogenen eingesetzt, da sie vermutlich ein besseres Wirkungs-Nebenwirkungsprofil besitzten. Mengenmäßig am bedeutensten sind die Phytoöstrogene aus den Stoffgruppen der Isoflavone, Cumestane und Indol-3-carbinole. Weit über 100 Pflanzen produzieren Phytohormone. Die bekanntesten sind die Sojabohne, Weintrauben, Leinsamen, Haferflocken, Spargel, Traubensilberkerze und roter Klee. Phytohormone können täglich in großer Menge aufgenommen werden (1mg pro kg Körpergewicht), wobei durchaus Plasmaspiegel von über 1µM erreicht werden. Gerade deshalb darf nicht davon ausgegangen werden, daß natürliche Produkte per se gut für die Gesundheit wären. Phytohormone und insbesondere deren Metaboliten, die während der intestinalen Passage entstehen, wurden vielfach nicht den gleichen Prüfbedingungen unterzogen wie sie für andere in Lebensmitteln vorkommenden Substanzen, wie z.B. Konservierungs-, Farb- oder Aromastoffen, heute selbstverständlich ist. Diese Arbeit soll deshalb anhand von in-vitro Tests an Mauslymphomzellen L5178Y für eine Auswahl an Phytohormonen und deren Metaboliten mögliche toxische oder gentoxische Effekte detektieren und die bestehende Datenlage ergänzen. Aus der Gruppe der Isoflavone wurden die Daidzeinmetaboloiten Equol und O-desmethylangolensin und die Glyceteinmetaboliten 3,4,7- und 4,6,7-Trihyroxyisoflavon untersucht. Aus der Gruppe der Flavone wurde Fisetin und aus der Gruppe der Stilbene Resveratrol untersucht. Weiterhin wurden Daten zu den Anthocyanen Delphinidin-, Pelargonidin- und Cyanidin-Chlorid erhoben. Toxische Effekte wurden anhand von Proliferatiosexperimenten, durch die Bestimmung der Zellvitalität (Ethidiumbromid-Flouresceinmethode) und durch die Analyse der Teilungsaktivität nach Behandlung mit Cytocalasin B und anschließender Bestimmung des Anteils mehrkerniger Zellen detektiert. Zur Bestimmung von gentoxischen Effekte wurde auf den Mikrokerntest zurückgegriffen. Ergänzend sollte eine Immunfloureszenzfärbung der Kinetochorproteine in Mikrokernen Aufschluß über aneugene oder klastogene Wirksamkeit der untersuchten Substanzen geben. Die in dieser Arbeit gewonnenen Daten weisen darauf hin, daß erste adverse Effekte der Phytohormone oder deren Metaboliten im Bereich der erreichbaren Plasmakonzentration liegen, so daß eine übertriebene Aufnahme hochdosierter Phytohormonen derzeit als kritisch erachtet und weiterer Forschungsbedarf festgestellt werden muß.
Mechanisms of apoptosis modulation and their contribution to genomic instability in tumor cells
(2004)
The concept of programmed cell death has been increasingly considered from various aspects since early 1970’s. Primarily, knowledge of apoptosis referred to morphological changes in which chromatin is condensed and increasingly fragmented, revealed as small structure in the nucleus. The membrane shrinks and the cell becomes dense as can be seen by flow cytometry. Interestingly, similar modes of cell deletion were observed in nematodes indicating that apoptosis is a highly conserved machinery. Three Caeonorhabditis elegans gene products are found to have high homology with mammalian apoptotic genes: CED-9 inhibits apoptosis and is related to bcl-2; CED-3 and CED-4 promote apoptosis and are related to caspase 9 and APAF-1. Apoptosis is not accidental death, but a highly controlled and medically important molecular process. More general terms such as ‘physiological’ or ‘regulated’ cell death cover different morphologies and sequences. Programmed suicide of cells that were subjected to toxic exogenous and endogenous stimuli plays a key role in understanding cancer development and its treatment. Apoptosis involves sequences of events that may overlap and play contradictory or antagonistic roles in cell death. Generally, the ability to trigger apoptotic processes in cancer cells would benefit an organism by keeping homeostasis intact. Programmed cell death is a regularly present mechanism, for instance, in lymphocyte recruitment in the thymus where immature lymphocytes may recognize host antigens. Therefore, such lymphocytes become apoptotic and are removed by macrophages. Removal prevents possible autoimmune diseases. Unlike apoptosis, necrosis is a passive process of cell death recognizable by membrane morphological changes and accompanied by leakage of intracellular material into intercellular space that may cause inflammation in the organism. Signals that may initiate apoptosis are generally classified into two groups: signals that launch extrinsic apoptotic pathways starting with aggregation of death receptors and intrinsic apoptotic pathways starting with disruption of intracellular homeostasis such as the release of mitochondrial factors or DNA degradation. Early in the process, apoptotic signals may lead to a broad range of signaling mechanisms such as DNA repair and assessment of DNA damage (check points). Thus, failure in any of these steps can cause a defective apoptotic response that plays a decisive role in both tumorigenesis and drug resistance in tumor treatment. More distinctly, the capability of cancer cells to go into apoptosis prevents further neoplastic changes. Generally, the purpose of this study is to investigate the balance between formation of genomic damage and induction of apoptosis under genotoxic stress. After genotoxic insult there are different possibilities for the fate of a cell (Figure 1). The genomic integrity is analyzed at cellular checkpoints, usually leading to a delay in cell cycle progression if DNA was damaged. Mutations in genes such as p53 and p21 change the cellular response to genotoxic stress and may alter the balance between apoptosis and genomic damage. However, p53 is usually mutated or not expressed in 70% of human tumors. Alterations in p53 states that reflect distinct apoptotic response upon induction of DNA damage were examined. In this study, three cell lines with distinct p53 states were used: TK6 harboring wild-type p53, WTK1 with mutated p53 and NH32 with knocked out p53. In the present work we applied different approaches to investigate the correlation between DNA damage and apoptotic responsiveness in cancer cell lines with different p53 states or in hormone responsive cell lines with over expressed bcl-2 gene. We were focused on effects caused by temporary down regulation of the p53 and Bcl-2 activity in human lymphoblastoid cell lines. In addition, we investigated the impact of estradiol-induced proliferation on apoptosis and DNA damage in stably transfected cells with bcl-2gene.
Die vorliegende Arbeit beschäftigt sich im Gegensatz zu bisherigen Studien (überwiegend im Rahmen von Querschnittsstudien) v.a. prospektiv mit der Untersuchung der Auswirkung verschiedener Faktoren (1. Prädialysephase, 2. Wechsel von der Hämodialyse zu HDF-Behandlung, 3. Einfluß einer Angiotensin IIAntagonistentherapie sowie (durch einmalige Erhebung) „Langzeit“-HDF-Behandlung)auf den relativen genetischen Schaden, ermittelt durch den Comet-Assay und den Mikrokern-Test in peripheren Lymphozyten bei Dialysepatienten bzw. Prädialysepatienten.
The biotransformation of 1,1,1,3,3-pentafluoropropane was investigated in rats and in in vitro systems. First, the metabolites were identified in vivo using GC/MS and 19F NMR analysis. The main metabolite was identified as trifluoroacetic acid, the minor metabolite as 3,3,3-trifluoropropionic acid and as a cleavage product, inorganic fluoride was found. As the in vitro system, liver microsomes from rat and human samples and rat liver homogenates were used. Trifluoroacetic acid and 3,3,3 trifluoropropionic acid were confirmed in vitro as metabolic intermediates, following biotransformation of 1,1,1,3,3-pentafluoropropane by the cytochrome P-450-system. Studies, designed for clarifying the cardiotoxicity of 1,1,1,3,3-pentafluoropropane were driven by the hypothesis that 3,3,3-trifluoropropionic acid is the toxic agent. This was based on the lethal toxicity, which was observed in previous in vivo experiments. In addition, the point of its structural similarity to toxic agents as for example monofluoroacetic acid or of possible metabolic intermediates like difluoroacrylic acid with known toxicity were considered to support this assumption. However, trifluoroacetic acid was neglected as the sought-after toxic agent because of its different toxic effects, known from literature. Investigations on the biotransformation of 3,3,3-trifluoropropionic acid were performed and resulted in no metabolic activity and in poor elimination of 3,3,3-trifluoropropionic acid in vivo. The histopathological effects on the heart, which were observed in the 90-day oral toxicity study of 1,1,1,3,3-pentafluoropropane in rats, namely mononuclear inflammatory cell infiltrations and degenerated myocardial fibers, were not observed after a 28 day repeated exposure of up to 10 mg/kg b.w. of 3,3,3-trifluoropropionic acid. However, a single high dose of 3,3,3-trifluoropropionic acid lead to severe toxicological effects. The difference in the observed toxic effects after a single and repeated administration may be due to adaptive mechanisms in rats. The toxicological effects included clinical signs like ataxia, coma and cramps. The conditions of the rats suggested possible inhibition of the energy supply to the organism. Furthermore, the interference of 3,3,3-trifluoropropionic acid in the functionality of the organism was investigated. Experiments were performed in vitro in rat liver and heart mitochondria to investigate effects on the mitochondrial ß-oxidation. However, the transformation of the substrate [U14C] palmitic acid in the ß oxidation pathway was not inhibited by 3,3,3-trifluoropropionic acid. In addition, no cytotoxicity of 3,3,3 trifluoropropionic acid was observed in the cell culture systems. The main effect after a single dose of 3,3,3-trifluoropropionic acid was seen in clinical pathology and metabonomic analysis. The decrease in blood glucose is considered to have the most far-reaching consequences for the toxicity of 3,3,3-trifluoropropionic acid. If considering this change as the primary effect after a single dose, secondary effects, for example, the above-mentioned clinical signs could be explained. In addition, the observed high level of ketone bodies might have been responsible for life-threatening possible ketoacidosis. In general, ketoacidosis occurs after an imbalance between glycolysis, lipolysis, TCA cycle activity and respiratory function. Based on the results, ß-oxidation of fatty acids was not affected, and due to the decrease in glucose levels and the high levels of acetyl CoA, glycolysis was considered not to be impaired. Increased amounts of acetyl CoA might be a result of insufficient activity of the TCA cycle. However, the inhibition of the TCA cycle can be based on the impairment of specific enzymes and/or on the involvement of messenger substrates like insulin. Supporting the first mentioned aspect are decreased levels of TCA cycle intermediates, like α-ketoglutarate or citrate, as seen in 1H-NMR spectra of urine. However, the second aspect would explain the drop in blood glucose with the impairment of glucose transporters or the impairment of the insulin balance. If a single dose of 3,3,3-trifluoropropionic acid had stimulated the insulin release, glycolysis would be activated, and high amounts of acetyl CoA would be produced. In case of impaired use by the TCA cycle, levels of ketone bodies would be increased. Experiments were designed to characterize the direct effect of 3,3,3-trifluoropropionic acid on rat insulinoma-derived INS-1 cells as possible increase in insulin release. Further investigations are necessary to answer in which step of the metabolic pathway 3,3,3-trifluoropropionic acid interferes or finally which specific enzyme is inhibited or activated by 3,3,3-trifluoropropionic acid, leading to the drop in blood glucose and finally in lethal toxicity.
The cyclic nucleotides cAMP and cGMP are two ubiquitous important second messengers, which regulate diverse physiological responses from vision and memory to blood pressure and thrombus formation. They act in cells via cAMP- and cGMP-dependent protein kinases (PKA and GK), cyclic nucleotide-gated channels and Epac. Although the concept of cyclic nucleotide signalling is well developed based on classical biochemical studies, these techniques have not allowed to analyze cAMP and cGMP in live cells with high temporal and spatial resolution. In the present study fluorescence resonance energy transfer was used to develop a technique for visualization of cAMP and cGMP in live cells and in vitro by means of fluorescent biosensors. Ligand-induced conformational change in a single nucleotide-binding domain flanked with green fluorescent protein mutants was used for dynamic, highly sensitive measurements of cAMP and cGMP. Such biosensors retained binding properties and chemical specificity of unmodified domains, allowing to image cyclic nucleotides in a physiologically relevant range of concentrations. To develop cAMP-sensors, binding domains of PKA, Epac and cAMP-gated HCN-channel were used. cGMP-sensors were based on single domains of GK and phosphodiesterases (PDEs). Sensors based on Epac were used to analyze spatio-temporal dynamics of cAMP in neurons and macrophages, demonstrating that cAMP-gradients travel with a high speed (~ 40 μm/s) throughout the entire cytosol. To understand the mechanisms of cAMP-compartmentation, kinetics properties of phosphodi-esterase (PDE2) were, next, analyzed in aldosterone producing cells. PDE2 is able to rapidly hydrolyze extensive amounts of cAMP, so that the speed of cAMP-hydrolysis is much faster than that of its synthesis, which might serve as a basis of compartmentation. cAMP-sensors were also used to develop a clinically relevant diagnostic method for reliable detection of β1-adrenergic receptor autoantibodies in cardiac myopathy patients, which has allowed to significantly increase the sensitivity of previously developed diagnostic approaches. Conformational change in a single binding domain of GK and PDE was, next, used to create novel fluorescent biosensors for cGMP. These sensors demonstrated high spatio-temporal resolution and were applied to analyze rapid dynamics of cGMP production by soluble and particulate guanylyl cyclases as well as to image cGMP in mesangial cells. In summary, highly sensitive biosensors for cAMP and cGMP based on single cyclic nucleotide-binding domains have been developed and used in various biological and clinically relevant applications.
In der vorliegenden Arbeit wurden die kardial differenzierten embryonalen Stammzellen (ES-Zellen) mittels der von Wobus et al. entwickelten Tröpfchentechnik gewonnen. Eine Optimierung der kardialen Ausbeute konnte durch eine Selektionsmethode erreicht werden, die auf der Expression eines Resistenzgens in den kardial differenzierten ES-Zellen beruht. Hierdurch wurde eine reproduzierbar hohe Anreicherung von ES-Kardiomyozyten erzielt. Die erstmalig durchgeführte quantitative Bestimmung der endogenen β-adrenergen Rezeptorexpression in ES-Kardiomyozyten zeigte eine Subtyp-Verteilung, die mit derjenigen in adulten Maus-Kardiomyozyten übereinstimmt, wobei eine höhere endogene Expression in ES-Kardiomyozyten vorlag. Ferner konnte durch eine β-adrenerge Stimulation in 16 Tage alten ES-Kardiomyozyten eine positive chronotrope Reaktion sowie eine Aktivierung der Adenylatzyklase-Aktivität hervorgerufen werden. Diese Ergebnisse zeigen, dass ES-Kardiomyozyten am 16. Differenzierungstag einen vollständig ausgereiften β-adrenergen Signalweg aufweisen und hinsichtlich der physiologischen Effekte vergleichbare Merkmale mit adulten Maus-Kardiomyoyzten haben. Ein weiteres Ziel dieser Arbeit war es, die Fähigkeit eines adenoviralen Gentransfers in ES-Kardiomoyzten zu untersuchen. Dabei zeigte sich, dass der Gentransfer mittels rekombinanten Adenoviren eine sehr effiziente und durchführbare Methode zur Expression von Transgenen in ES-Kardiomyozyten ist. Weiterhin konnte die funktionelle Kopplung der adenoviral überexprimierten β1-adrenergen Rezeptoren nachgewiesen werden. Die Überexpression hatte eine ausgeprägte Sensitivierung der Rezeptorantwort zur Folge, während die maximale Isoprenalin-induzierte cAMP-Produktion nur wenig erhöht wurde. Dies entspricht Befunden an transgenen Mausmodellen mit einer β1-adrenergen Rezeptor-überexpression. Eine Sensitivierung des chronotropen Effektes konnte dagegen nicht gezeigt werden. Möglicherweise führte die Transfektion der ES-Kardiomyozyten-Zellverbände nur zu einem oberflächlich begrenzten Gentransfer, der keinen Einfluss auf die Gesamtheit des funktionellen Synzytiums hatte. Außerdem wurde in dieser Arbeit der Einfluss einer unterschiedlichen Phosducin-Expression auf die kardiale Differenzierungsfähigkeit in transgenen ES-Zellen untersucht. Dabei konnte kein signifikanter Unterschied in der kardialen Differenzierung sowie in der Basalfrequenz von homozygoten und heterozygoten Phosducin Knock-out Klonen beziehungsweise von Phosducin überexprimierenden Zellklonen festgestellt werden.