Refine
Has Fulltext
- yes (377)
Is part of the Bibliography
- yes (377)
Year of publication
Document Type
- Doctoral Thesis (316)
- Journal article (52)
- Book article / Book chapter (4)
- Conference Proceeding (2)
- Book (1)
- Other (1)
- Review (1)
Language
- German (377) (remove)
Keywords
- Taufliege (24)
- Genexpression (20)
- Drosophila (15)
- Listeria monocytogenes (15)
- Maus (15)
- Molekularbiologie (14)
- Signaltransduktion (14)
- Kernhülle (12)
- Apoptose (11)
- Drosophila melanogaster (10)
- Genregulation (10)
- Melanom (9)
- apoptosis (9)
- Apoptosis (8)
- Mensch (8)
- Molekulargenetik (8)
- Bioinformatik (7)
- Meiose (7)
- Microarray (7)
- Rezeptor (7)
- Biene (6)
- Bordetella (6)
- Embryonalentwicklung (6)
- Epigenetik (6)
- Virulenz (6)
- dSTORM (6)
- gene expression (6)
- nuclear envelope (6)
- Ameisen (5)
- Antikörper (5)
- Chromatin (5)
- Genmutation (5)
- Glatter Krallenfrosch (5)
- Knochen-Morphogenese-Proteine (5)
- Mikroskopie (5)
- Multiples Myelom (5)
- Plasmozytom (5)
- Säugetiere (5)
- Transkriptionsfaktor (5)
- Autoimmunität (4)
- BMP (4)
- Bruchpilot (4)
- Calcium (4)
- Entwicklung (4)
- Fanconi-Anämie (4)
- Fluoreszenz (4)
- Fluoreszenzmikroskopie (4)
- HMG-Proteine (4)
- Immunsystem (4)
- Malaria (4)
- Mausmodell (4)
- Mitochondrien (4)
- Mitochondrium (4)
- Motoneuron (4)
- Myc (4)
- Nervenzelle (4)
- Ontogenie (4)
- Phosphorylierung (4)
- Physiologische Chemie (4)
- PrfA (4)
- Schwertkärpfling (4)
- Stammzelle (4)
- Synapse (4)
- Synaptonemalkomplex (4)
- T-Lymphozyt (4)
- Transforming Growth Factor beta (4)
- Xenopus laevis (4)
- Xiphophorus (4)
- Zelle (4)
- Zellmigration (4)
- melanoma (4)
- mitochondria (4)
- signal transduction (4)
- Actin (3)
- Allergie (3)
- Aspergillus fumigatus (3)
- Bakterien (3)
- Bordetella bronchiseptica (3)
- Camponotus (3)
- DNS (3)
- DNS-Reparatur (3)
- DNS-Schädigung (3)
- Elektronenmikroskopie (3)
- Elektroporation (3)
- Endothelzelle (3)
- Erbkrankheit (3)
- Evolution (3)
- Genotoxizität (3)
- Glutamatrezeptor (3)
- Humangenetik (3)
- Immunologie (3)
- Infektion (3)
- Listeria (3)
- Meiosis (3)
- Membranproteine (3)
- Mikrobiologie (3)
- Modellierung (3)
- Motilität (3)
- Multiple Sklerose (3)
- Mutation (3)
- Nephroblastom (3)
- Neurodegeneration (3)
- Neurogenese (3)
- Oozyte (3)
- Photoinduzierter Elektronentransfer (3)
- Plasmodium falciparum (3)
- RNS-Spleißen (3)
- Spermatogenese (3)
- Stoffwechsel (3)
- Synaptonemal complex (3)
- Systembiologie (3)
- TRAIL (3)
- Therapie (3)
- Tissue Engineering (3)
- Tumor-Nekrose-Faktor (3)
- Tumorimmunologie (3)
- Tumorzelle (3)
- Ubiquitinierung (3)
- Vaccinia-Virus (3)
- Verhalten (3)
- Zelldifferenzierung (3)
- Zytotoxizität (3)
- ants (3)
- bacteria (3)
- behaviour (3)
- malaria (3)
- meiosis (3)
- oxidative stress (3)
- receptor (3)
- Überexpression (3)
- ANCA (2)
- Ackerschmalwand (2)
- Allergy (2)
- Altern (2)
- Alzheimer-Krankheit (2)
- Angiogenese (2)
- Angiotensin II (2)
- Apis mellifera (2)
- Arginin (2)
- Auge (2)
- Aurora-A (2)
- Autoaggressionskrankheit (2)
- B chromosomes (2)
- B-Zelle (2)
- Bioinformatics (2)
- Biologische Uhr (2)
- Biomarker (2)
- Biomechanik (2)
- Blochmannia (2)
- Blut-Hirn-Schranke (2)
- Bordetella pertussis (2)
- Bordetella petrii (2)
- Brustkrebs (2)
- BvgAS-System (2)
- CD83mRNA (2)
- Chromosomes (2)
- Colonkrebs (2)
- Cysteinderivate (2)
- Cytokine (2)
- DNA delivery (2)
- DNS-Doppelstrangbruch (2)
- Degeneration (2)
- Dendritische Zelle (2)
- Diagnostik (2)
- Differenzierung (2)
- Domäne <Biochemie> (2)
- Dynamik (2)
- EGFR (2)
- Einzelmolekülmikroskopie (2)
- Einzelmolekülspektroskopie (2)
- Elektrofusion (2)
- Emerin (2)
- Entzündung (2)
- Enzym (2)
- Epidermaler Wachstumsfaktor-Rezeptor (2)
- Escherichia coli (2)
- Ethanol (2)
- Expressionsanalyse (2)
- FGF (2)
- Fibrose (2)
- Fisch (2)
- Fluoreszenzkorrelationsspektroskopie (2)
- Fluoreszenzspektroskopie (2)
- Gamet (2)
- Gehirn (2)
- Gentransfer (2)
- Geschlechtsbestimmung (2)
- Glioblastom (2)
- Glucocorticosteroide (2)
- Helicobacter pylori (2)
- Herzinsuffizienz (2)
- Heterologe Genexpression (2)
- Hochauflösung (2)
- Honigbiene (2)
- Hyaluronsäure (2)
- Hydrogel (2)
- Hämatopoese (2)
- Hühnerembryo (2)
- Immunbiologie (2)
- Impfstoff (2)
- Impfstoffe (2)
- In vitro (2)
- Insekt (2)
- Interaktionen (2)
- Interleukin 4 (2)
- Interleukin-4 (2)
- Internaline (2)
- JNK (2)
- Japankärpfling (2)
- Kernlamina (2)
- Kernporenkomplex (2)
- Kinematik (2)
- Klassische Konditionierung (2)
- Knochenmark (2)
- Knockout <Molekulargenetik> (2)
- Kristallstruktur (2)
- Lamina (2)
- Lamine (2)
- Landouzy-Déjerine-Atrophie (2)
- Laufen (2)
- Ligand <Biochemie> (2)
- Lokalisationsmikroskopie (2)
- MAN1 (2)
- MAPK (2)
- Macaranga (2)
- Major Vault Protein (2)
- Malariamücke (2)
- Melanin (2)
- Methode (2)
- Methylierung (2)
- Microscopy (2)
- Mitose (2)
- Morphologie <Biologie> (2)
- Mutagenese (2)
- N-Myc (2)
- Nervendegeneration (2)
- Neuroblastom (2)
- Next Generation Sequencing (2)
- Oligomerisation (2)
- Onkogen (2)
- Oxidativer Stress (2)
- Peptide (2)
- Peroxisom (2)
- Phosphatidylinositolkinase <Phosphatidylinositol-3-Kinase> (2)
- Photorezeptor (2)
- Pilzkörper (2)
- Plasmamembran (2)
- Platy (2)
- Proepikard (2)
- Progeria adultorum (2)
- Proteinase 3 (2)
- Proteine (2)
- Proteinkinasen (2)
- Proteinsynthese (2)
- RNA interference (2)
- RNS (2)
- Racemase (2)
- Real time quantitative PCR (2)
- Response-Regulator (2)
- Rezeptortyrosinkinase (2)
- Rossameise (2)
- SRPK (2)
- Salmonella typhimurium (2)
- Serin (2)
- Serpin (2)
- Stathmin (2)
- Stofftransport <Biologie> (2)
- Symbiose (2)
- Synapsin (2)
- T Lymphocytes (2)
- T-Zellen (2)
- TFIIIA (2)
- TNF (2)
- Thermoregulation (2)
- Thrombozyt (2)
- Tiermodell (2)
- Transfektion (2)
- Transkription (2)
- Trypanosomen (2)
- Tumor (2)
- Wilms Tumor (2)
- Wilms tumor (2)
- Wirkstoff-Rezeptor-Bindung (2)
- Xmrk (2)
- Yersinia enterocolitica (2)
- Zelltod (2)
- Zellzyklus (2)
- Zellüberleben (2)
- Zoologie (2)
- Zweikomponenten-System (2)
- angeborenes Immunsystem (2)
- axonaler Transport (2)
- brood (2)
- cardiac hypertrophy (2)
- chick embryo (2)
- cytogenetics (2)
- cytotoxicity (2)
- dendritic cell (2)
- development (2)
- early development (2)
- emerin (2)
- expression analysis (2)
- fibrosis (2)
- fish (2)
- hochauflösende Fluoreszenzmikroskopie (2)
- honey bee (2)
- honeybee (2)
- insect (2)
- internalins (2)
- kardiale Hypertrophie (2)
- lamina (2)
- miR-26 (2)
- microarray (2)
- modeling (2)
- mutagenesis (2)
- mutation (2)
- nephroblastoma (2)
- nuclear lamina (2)
- phage display (2)
- phosphorylation (2)
- photoinduced electron transfer (2)
- proepicardium (2)
- spermatogenesis (2)
- spermiogenesis (2)
- synapse (2)
- transcription (2)
- "Balanced-lethal" Plasmid-System (1)
- 1 (1)
- 13C-isotopologue profiling (1)
- 16q22 (1)
- 2"-> (1)
- 2':6' (1)
- 25 Dihydroxyvitamin D3 (1)
- 25 dihydroxyvitamin D3 (1)
- 2D gel analysis (1)
- 2D-Gel-Analyse (1)
- 3D-Sehen (1)
- 3D-Zellkulturen (Krebstherapie) (1)
- 3d-vision (1)
- 41BBL (1)
- 4Pi (1)
- ADP (1)
- AICD (1)
- AKR-2B Fibroblasten (1)
- AKR-2B fibroblasts (1)
- AMACR (1)
- AMPK (1)
- ANP (1)
- AP-1 (1)
- APP (1)
- ATP (1)
- Abbe-Limit (1)
- Abscisinsäure (1)
- Abwasserreinigung (1)
- ActA (1)
- ActR-IIB (1)
- Acute bee paralysis virus (1)
- Adhesion (1)
- Adhäsine (1)
- Adhäsion (1)
- Adhäsionsmoleküle (1)
- Adipozytäre mesenchymale Stammzelle (1)
- Adrenocortical carcinoma (1)
- Advanced Glycation Endproducts (1)
- Advanced glycation endproducts (1)
- Affinitätsreinigung (1)
- Afipia (1)
- Afipia felis (1)
- Agalia duperreana (1)
- Aglaia (1)
- Aglaia dasyclada (1)
- Aglaia duperreana (1)
- Agrobacterium vitis (1)
- Aktive Zone (1)
- Akute Paralyse <Bienenkrankheit> (1)
- Akutes Bienen Paralyse Virus (1)
- Alburnus alburnus (1)
- Aldosteron (1)
- Algen (1)
- Algorithmus (1)
- Alignment <Biochemie> (1)
- Alkohol (1)
- Alkylantien (1)
- Allerg (1)
- Alpha-Methylacyl-CoA racemase (1)
- Alpha-Methylacyl-CoA-Racemase (1)
- Aluminium (1)
- Alzheimer (1)
- Alzheimer Krankheit (1)
- Alzheimer's Disease (1)
- Alzheimerkrankheit (1)
- Amazon Molly (1)
- Ameisenstaat (1)
- Amelogenese (1)
- Amyotrophe Lateralsklerose (1)
- Analyse (1)
- Aneugene (1)
- Angewandte Mikrobiologie (1)
- Angiotensin II Typ 1a-Rezeptor (1)
- Anionenkanal (1)
- Anionentranslokator (1)
- Anisomycin (1)
- Anisotropie (1)
- Anopheles gambiae (1)
- Antigen CD19 (1)
- Antigen CD40 (1)
- Antigen CD8 (1)
- Antigenpräsentation (1)
- Antigensuche (1)
- Antigentherapie (1)
- Antikörper-Mikroarray (1)
- Antioxidantien (1)
- Antralfollikel (1)
- Aplysina (1)
- Aplysina caulifromis (1)
- Aplysina insularis (1)
- Apoptose-Resistenz (1)
- Apsi mellifera (1)
- Aquaplaning (1)
- Arabidopsis thaliana (1)
- Array-Technologie (1)
- ArsRS (1)
- Arteriogenese (1)
- Arthropoden (1)
- Arylphorin AFP (1)
- Arylphorine (1)
- Assoziatives Gedächtnis (1)
- Asthma (1)
- Atopic Dermatitis (1)
- Atopische Dermatitis (1)
- Atriales natriuretisches Hormon (1)
- Atriales natriuretisches Peptid (1)
- Attenuierung (1)
- Aufmerksamkeitsdefizit-Syndrom (1)
- Aufnahme (1)
- Autoantikörper (1)
- Autoimmunerkrankungen (1)
- Autoimmunity (1)
- Autoimmunkrankheit (1)
- Automated Image Analysis (1)
- Automatisierung (1)
- Automatisierung der Analyse (1)
- Autophagie (1)
- Axon (1)
- B Chromosomen (1)
- B cell differentiation (1)
- B cell lymphoma (1)
- B-2 (1)
- B-Chromosom (1)
- B-Chromosomen (1)
- B-Lymphozyt (1)
- B-Lymphozyten (1)
- B-MYB (1)
- B-Zell-Lymphom (1)
- B-Zelldifferenzierung (1)
- B-lymphocytes (1)
- B. petrii-Isolate (1)
- B. petrii-Varianten (1)
- BBL (1)
- BDNF (1)
- BIAcore (1)
- BMP Rezeptoren (1)
- BMP receptos (1)
- BMP-2 (1)
- BMPR-IA (1)
- BMPR-IB (1)
- BMPs (1)
- BRP (1)
- BSD (1)
- BYL-719 (1)
- Bacterial Artificial Chromosome (1)
- Bakterielle Infektion (1)
- Bandscheibenerkrankung (1)
- Bandscheibenkrankheit (1)
- Baum (1)
- Bcl-2 Familie (1)
- Bcl-2 family (1)
- Bcl-2-Proteinfamilie (1)
- Bcl-X (1)
- Becker (1)
- Behandlungsoption (1)
- Best's Disease (1)
- Beta-Rezeptor (1)
- Bewegungssehen (1)
- Biene <Gattung> (1)
- Bienenbrut (1)
- Bienenwolf (1)
- Bienenzelle (1)
- Bildanalyse (1)
- Bilderkennnung (1)
- Bilderkennung (1)
- Bildverarbeitung (1)
- Bilharziose (1)
- Bindeprotein (1)
- Bindeproteine (1)
- Bio-artifizieller Tubulus (1)
- Bioavailability (1)
- Biochemie (1)
- Biochemische Evolution (1)
- Biodiversität (1)
- Bioinformatic (1)
- Biologische Schädlingsbekämpfung (1)
- Biopharmazeutika (1)
- Biosynthese (1)
- Biotechnologie (1)
- Bioverfügbarkeit (1)
- Blattschneiderameisen (1)
- Blaue Fleischfliege (1)
- Blimp-1 (1)
- Blut (1)
- Blutserum (1)
- Blutviskosität (1)
- Bombina variegata (1)
- Bone Morphogenetic Protein (1)
- Boolesches Netz (1)
- Bordetella holmesii (1)
- Borneo (1)
- Bortezomib (1)
- Bos taurus (1)
- Brain (1)
- Bromoisoxazolinalkaloide (1)
- Bromorganische Verbindungen (1)
- Bromotyrosinalkaloide (1)
- BronchipretTP (1)
- Brownsche Bewegung (1)
- Brut (1)
- Brutbiologie (1)
- Brutfürsorge (1)
- Brutpflege (1)
- Buckelzirpen (1)
- Burkina Faso (1)
- BvgAS (1)
- BvgAS system (1)
- C-Typ natriuretisches Peptid (1)
- C1 Inhibitor (1)
- C1-Inhibitor (1)
- C1INH (1)
- C2C12 cells (1)
- C2C12-Zellen (1)
- CD27L (1)
- CD28 (1)
- CD4+ (1)
- CD83mRNS (1)
- CHO cells (1)
- CHO-Zellen (1)
- CK2 (1)
- CK2ß (1)
- CNGA3 (1)
- CNTF (1)
- CRE (1)
- CSP (1)
- CTCL (1)
- CTGF (1)
- CXCR4 (1)
- CaCo-2 cell (1)
- Cadherin-13 (1)
- Caenorhabditis elegans (1)
- Calcineurin (1)
- Calcium Imaging (1)
- Calcium imaging (1)
- Calcium-bindende Proteine (1)
- Calciumfreisetzung (1)
- Calciumion (1)
- Calciumkonzentration (1)
- Calcyon (1)
- Cameleon (1)
- Carcinogenese (1)
- Carfilzomib (1)
- Carnica-Biene (1)
- Caspase (1)
- Cataglyphis-Wüstenameisen (1)
- Cathepsin (1)
- Ceramide (1)
- Channelrhodopsin (1)
- Charakterisierung (1)
- Chemokine (1)
- Chemosensitivity (1)
- Chemosensitivität (1)
- Cholesterin (1)
- Cholesterol (1)
- Chromatin Immunoprecipitation (1)
- Chromatinimmunpräzipitation (1)
- Chromosom (1)
- Chromosom 11 (1)
- Chromosom 11p13 (1)
- Chromosomen (1)
- Chromosomeninstabilitätssyndrome (1)
- Ciliary neurotrophic factor (1)
- Circadiane Rhythmen (1)
- Click-Chemie (1)
- ClyA (1)
- Colon (1)
- Containment <Gentechnologie> (1)
- Corazonin (1)
- Corticosteroide (1)
- Crematogaster (1)
- CxxM-Motiv (1)
- CxxM-motif (1)
- Cyaninfarbstoff (1)
- Cyclo-GMP (1)
- Cysteine String Protein (1)
- Cytochrom C (1)
- Cytochrom c (1)
- Cytochrome C (1)
- Cytogenetik (1)
- Cytokeratin (1)
- Cytokeratine (1)
- Cytologie (1)
- Cytomatrix der aktiven Zone (1)
- Cytomegalie-Virus (1)
- DEVDase (1)
- DNA Barcoding (1)
- DNA damage (1)
- DNA fingerprinting (1)
- DNA sequence analysis (1)
- DNA-Extraktion (1)
- DNA-Fingerprinting (1)
- DNA-Methylierung (1)
- DNA-Polymorphismen (1)
- DNA-Reparatur (1)
- DNA-Sequenz (1)
- DNA-Sequenzanalyse (1)
- DNA-extraction (1)
- DNA-polymporhisms (1)
- DNER (1)
- DNS-Methyltransferase (1)
- DNS-Sequenz (1)
- DSI (1)
- Datenanalyse (1)
- Daughter of Sevenless (1)
- Delayed Stereopsis Illusion (1)
- Delta (1)
- Detektion (1)
- Deubiquitinierung (1)
- Deutschland / Stammzellgesetz (1)
- Diabetes mellitus (1)
- Dielektrophorese (1)
- Differential Display PCR (1)
- Differentielle Genexpression (1)
- Diffusion (1)
- Dnaschaden (1)
- Dominanz (1)
- Dopamin (1)
- Dopamine (1)
- Dopaminerge Nervenzelle (1)
- Dreidimensionale NMR-Spektroskopie (1)
- Drohne (1)
- Drohnen (1)
- Druckmessung (1)
- Drugtargets (1)
- Duchenne (1)
- Duchflußzytophotometrie (1)
- Durchflusscytometrie (1)
- Dynamics (1)
- E2F (1)
- EAE (1)
- EGFP (1)
- EHEC (1)
- EIEC (1)
- EL-4 (1)
- ELISA (1)
- ERK (1)
- Echinococcus (1)
- Eierstockkrebs (1)
- Einzelzell-PCR (1)
- Eisen (1)
- Eisenoxidnanopartikel (1)
- Electrofusion (1)
- Electron Microscopy (1)
- Electropermeabilization (1)
- Electroporation (1)
- Elektrische Eigenschaft (1)
- Elektrophysiologie (1)
- Elongation factor 1A (1)
- Elongationsfaktor 1A (1)
- Embryo (1)
- Embryonale Stammzellen (1)
- Endosom (1)
- Endosymbiont (1)
- Endosymbionten (1)
- Endothelial cells (1)
- Endothelzellen (1)
- Entwicklungsgeschwindigkeit (1)
- Enzymaktivität (1)
- Ep45 (1)
- Epidermaler Wachstumsfaktor (1)
- Epigenetische Uhr (1)
- Epikard (1)
- Epimutationen (1)
- Epipremnum aureum (1)
- Epitop (1)
- Epitop-Tag (1)
- Ereignisdatenanalyse (1)
- Erfahrungsorientiertes Lernen (1)
- Erythrozyt (1)
- Ethanoltolerance (1)
- Etherisches Öl (1)
- Evidenz (1)
- Experimental autoimmune encephalomyelitis (1)
- Experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis (1)
- Explorative Datenanalyse (1)
- Expression (1)
- Expressionskartierung (1)
- Expressionsmuster (1)
- Expressionssysteme (1)
- Extrakorporale Befruchtung (1)
- Extrembiotop (1)
- FAAP100 (1)
- FADS1 (1)
- FADS2 (1)
- FADS3 (1)
- FANCO (1)
- FAP (1)
- FSHD (1)
- Facioscapulohumeral muscular dystrophy (1)
- Fadenbakterien (1)
- Fallbeispiele (1)
- Fanconi Anämie (1)
- Fanconi anemia (1)
- Fas (1)
- Fas-Ligand (1)
- Fazialisläsion (1)
- Fbw7 (1)
- Feature-Selection (1)
- Fertilität (1)
- Festphasenmikroextraktion (1)
- Fettgewebsstammzellen (1)
- Fettsäuredesaturasen (1)
- Fibrin (1)
- Fibroblast (1)
- Fibroblast activator protein I (1)
- Fibroblastenwachstumsfaktor (1)
- Filamentöses Hämagglutinin (1)
- Fisch-Modell-System (1)
- Fisher-Score (1)
- Fleischfressende Pflanzen (1)
- Fliege (1)
- Fluorescence (1)
- Fluorescence in situ hybridization (1)
- Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (1)
- Fluoreszenzlebensdauer-Mikroskopie (1)
- Fluoreszenzlöschung (1)
- Fluoreszenzsonden (1)
- Flussufer (1)
- Flächenbedarf (1)
- Foamyvirus (1)
- Formicidae (1)
- Fortpflanzungsverhalten (1)
- Fuchsbandwurm (1)
- Funktion (1)
- Fusion (1)
- Futterentzug (1)
- G2/M-transition (1)
- G2/M-Übergang (1)
- GAP (1)
- GC-A (1)
- GDF-5 (1)
- GEF (1)
- GFP (1)
- GITRL (1)
- GM-CSF (1)
- GPI-verankerte Proteine (1)
- GST fusion protein (1)
- GST-Fusionsprotein (1)
- Galactosidase <beta-> (1)
- Galektine (1)
- Gallium-68 Pentixafor (1)
- Gap-gen (1)
- Gastrointestinaler Tumor (1)
- Gastrointestinaltrakt (1)
- Gastrulation (1)
- Gedächtnis (1)
- Gefäße (1)
- Gefäßkrankheit (1)
- Gelatine (1)
- Gen (1)
- Gen notch (1)
- Gendefekt (1)
- Genduplikation (1)
- Gene Regulation (1)
- Generalisierung (1)
- Genetik (1)
- Genetische Variabilität (1)
- Genidentifizierung (1)
- Genkartierung (1)
- Genort (1)
- Genotoxicitiy (1)
- Genotyp-Phänotyp Korrelation (1)
- Genpanel (1)
- Gentechnologie (1)
- Gentherapie (1)
- Geschlechtschromosom (1)
- Geschlechtschromosomen (1)
- Gewebe (1)
- Gezeilte Mutagenese (1)
- Glaukom (1)
- Glucosetransporter Typ3 (1)
- Glukokortikoid-Rezeptor Modulator (1)
- Glutamat-Decarboxylase (1)
- Glutathion-Reductase (1)
- Glutathionreduktase (1)
- Glykoproteine (1)
- Gonadenentwicklung (1)
- Grabeverhalten (1)
- Gram-negative Bakterien (1)
- Granuloma gangraenescens (1)
- Granulozyt (1)
- Große Wachsmotte (1)
- Grün fluoreszierendes Protein (1)
- Guanosintriphosphatasen (1)
- Guanylat bindende Proteine (1)
- Guanylatzyklase (1)
- Guanylylcyclase (1)
- Guanylylcyclase B Rezeptor (1)
- Gynogenese (1)
- H-Dimerbildung (1)
- H2O2 (1)
- HAE (1)
- HBMEC (1)
- HIV (1)
- HIV-1 (1)
- HMG (1)
- HMG proteins (1)
- HMGA1 (1)
- HMGN Proteine (1)
- HMGN proteins (1)
- HNPCC (1)
- HP1021 (1)
- HP1043 (1)
- HPF (1)
- HPK1 (1)
- HUVEC (1)
- Haftung (1)
- Has2 (1)
- Hauptbindungsdeterminante (1)
- Hautlymphom (1)
- Hauttumor (1)
- Hb-Jet (1)
- Hefe (1)
- Hefeartige Pilze (1)
- Hemibodies (1)
- Hereditary Angioedem (1)
- Hereditäres Angioödem (1)
- Herz (1)
- Heterochromatin (1)
- Hexamerin (1)
- Hexamerine (1)
- Hey (1)
- Hey1 (1)
- Hey2 (1)
- Hfq (1)
- Hidden-Markov-Modell (1)
- High throughput screening (1)
- High-End-Mikroskopie (1)
- Himmelskompass (1)
- Hippocampus (1)
- Histon-Demethylase UTX (1)
- Hitzeschock-Proteine (1)
- Hitzestress (1)
- Hochaufgelöste Fluoreszenzmikroskopie (1)
- Hochauflösendes Verfahren (1)
- Hochgeschwindigkeitsmikroskopie (1)
- Hohlfaserreaktor (1)
- Holobiont (1)
- Holstein <Rind> (1)
- Hsp90 (1)
- Huhn (1)
- Humanisierung (1)
- Humorale Immunität (1)
- Huwe1 (1)
- Hydrogele (1)
- Hymenoptera (1)
- Hypertrophie (1)
- Hämolysin (1)
- Hörstörungen (1)
- Hüllprotein (1)
- Hüllproteine (1)
- IL-4 (1)
- INM (1)
- Identifikation (1)
- Identifizierung (1)
- Identifizierungspipeline (1)
- Illusion (1)
- Immuncytochemie (1)
- Immundefizienz (1)
- Immunglobulin M (1)
- Immunmodulation (1)
- Immunoconjugate (1)
- Immunohistochemistry (1)
- Immunology (1)
- Immunreaktion (1)
- Implantat (1)
- Implantatmatrices (1)
- In situ Hybridisierung (1)
- Individuum (1)
- Induzierte Mutation (1)
- Infertilität (1)
- Inhibition (1)
- Innere Uhr (1)
- Insekten (1)
- Insekten-Pflanzen-Interaktion (1)
- Insektennavigation (1)
- Insertions-Duplikations-Mutagenese IDM (1)
- Insertionsmutagenese (1)
- Insulin (1)
- Integrase (1)
- Interaktion (1)
- Interferon (1)
- Interleukin 13 (1)
- Internalin (1)
- Intervallzeitmessung (1)
- Intrazelluläre Symbiose (1)
- Intrazellulärraum (1)
- Introgression (1)
- Invasion (1)
- Ionisierende Strahlung (1)
- Ionotrope Glutamatrezeptoren (1)
- Iron Responsive Elements (1)
- Isoform (1)
- Isoformen (1)
- Isolierung (1)
- Isomer (1)
- J774 (1)
- J774-Makrophagen (1)
- Jak/ STAT (1)
- Jugendentwicklung (1)
- Jungfernzeugung (1)
- Kaliumkanal (1)
- Kaliumkanäle (1)
- Kannenpflanze (1)
- Kardiogenese (1)
- Kardiomyopathie (1)
- Kardiovaskuläres System (1)
- Kathepsin (1)
- Kathepsin B (1)
- Kathepsin L (1)
- Kehlkopf (1)
- Keimzellmosaik (1)
- Kern-Zytosoltranslokation (1)
- Kernaktin (1)
- Kernhüllenbildung (1)
- Kernmembran (1)
- Kernmyosin (1)
- Kernpore (1)
- Kernporen-Komplex (1)
- Kernproteine (1)
- Kinabalu National Park (1)
- Kinasen (1)
- Kinetik (1)
- Klassifikation (1)
- Klassifizierung (1)
- Klastogene (1)
- Kleine GTP-bindende Proteine (1)
- Klettern (1)
- Klimaneutralität (1)
- Klimapflanzen (1)
- Klimawandel (1)
- Klonierung (1)
- Knochen (1)
- Knochenbildung (1)
- Knock-Out (1)
- Knockout-Maus (1)
- Knockout-Mäuse (1)
- Knopfkopf (1)
- Ko-Kultur (1)
- Kognition (1)
- Kohlenstoffkatabolitrepression (1)
- Kohlenstoffstoffwechsel (1)
- Kollagen (1)
- Koloniegröße (1)
- Koloniegründung (1)
- Kolonkarzinom (1)
- Konditionierung (1)
- Konfokale Mikroskopie (1)
- Kontrolle (1)
- Kontrollmechanismen (1)
- Korrelative Mikroskopie (1)
- Krebs <Medizin> (1)
- Krebserkrankungen (1)
- Krebsforschung (1)
- Krebstherapie (1)
- Kreuzvalidierung (1)
- Kristallstrukturanalyse (1)
- Kutikularwachs (1)
- Kälteschock (1)
- Kälteschock-Proteine (1)
- L5178Y cells (1)
- L5178Y-Zellen (1)
- LAP2 alpha (1)
- LASP-1 (1)
- LEM Domäne (1)
- LEM domain (1)
- LEM domaine (1)
- LEM-Domänen (1)
- LIFR (1)
- LIN-9 (1)
- LIN9 (1)
- LINC complex (1)
- LIPI-2 (1)
- LOH 11q (1)
- LOH 16q (1)
- LTP (1)
- LaXp180 (1)
- Lactamase <beta-> (1)
- Lamin B (1)
- Lamin B3 (1)
- Lamin C2 (1)
- Lamina-associated polypeptides (1)
- Lamina-assoziierte Polypeptide (1)
- Laminopathie (1)
- Langzeitgedächtnis (1)
- Laser-Mikrodissektion (1)
- Laterale Dichte (1)
- Laufkäfer (1)
- Leber (1)
- Lenalidomid (1)
- Leukozytenelastase (1)
- Ligand-Rezeptor Komplex (1)
- Ligandenbindedomäne (1)
- Light-activation (1)
- Lipidtransport (1)
- Listeria ivanovii (1)
- Listeria monocytogenens (1)
- Lymphom (1)
- Lymphomagenese (1)
- Lymphozyt (1)
- Lymphozyten (1)
- Lymphozyten mediierter Angriff auf Neurone (1)
- Lysosom (1)
- MALT (1)
- MAP-Kinase (1)
- MCP-1 (1)
- MHC (1)
- MLH1 (1)
- MMR-Reparatur (1)
- MRT (1)
- MSH2 (1)
- MSOT (1)
- MYCN-amplified (1)
- Macrophage (1)
- Magnetkompass (1)
- Makrophage (1)
- Makuladegeneration (1)
- Makuladystrophie (1)
- Malaria tropica (1)
- Malat1 (1)
- Malaysia (1)
- Markierungen synaptischer Proteine (1)
- Mathematisches Modell (1)
- Maus-Modell (1)
- Medizinisches Versorgungszentrum (1)
- Meliaceae (1)
- Melphalan (1)
- Membran-Adressierungs-Signal (1)
- Membranbarriere (1)
- Merkel cell carcinoma (1)
- Merkel-Zellkarzinom (1)
- Merkelzellkarzinom (1)
- Mesenchym (1)
- Mesenchymale Stammzelldifferenzierung (1)
- Messenger-RNS (1)
- Metabolische Stoffwechselmodellierung (1)
- Metabolismus (1)
- Metabolomik (1)
- Metabonomik (1)
- Metastase (1)
- Metastasen (1)
- Methylenblau (1)
- Metochondriale DNS (1)
- Microsatellite (1)
- Microthrix parvicella (1)
- Mikrobiota (1)
- Mikrofluidik (1)
- Mikrosatellit (1)
- Mikrosatelliten Instabilität (1)
- Mikrostruktur (1)
- Mikrostrukturen (1)
- Mikroumwelt (1)
- Mimetika (1)
- Mimics (1)
- Mineralocorticoidrezeptor (1)
- Mismatch (1)
- Mismatch Reparatur System (1)
- Mismatchrepair (1)
- Mismatchreparatur (1)
- Mitogen-aktivierte Proteinkinase (1)
- Mitteldarm (1)
- Miz1 (1)
- Mlh1 (1)
- Modeling (1)
- Modell (1)
- Modul (1)
- Module search (1)
- Modulsuche (1)
- Molekulare Biophysik (1)
- Molekulare Erkennung (1)
- Molekulare Hybridisierung (1)
- Moleküle (1)
- Monogamie (1)
- Monozyten (1)
- Morbus Best (1)
- Morphogenese (1)
- Morphologie (1)
- Morphology (1)
- Mosaik (1)
- Motoneuronenerkrankung (1)
- Motorische Endplatte (1)
- Mouse model (1)
- MppA (1)
- Multi-Adaptor-Protein (1)
- Multiple Sclerosis (1)
- Muskelentwicklung (1)
- Mustererkennung (1)
- Musterlernen (1)
- Mustervergleich (1)
- Mutante (1)
- Mutanten (1)
- Mutationsanalyse (1)
- Mutationsrate (1)
- Mutualismus (1)
- Myatrophische Lateralsklerose (1)
- Mycolata (1)
- Myelom (1)
- Myoblast (1)
- Myoblasten (1)
- Myotonische Dystrophie (1)
- Myristylierung (1)
- Myrothamnus flabellifolia (1)
- Mäuse (1)
- N-Glykosylierung (1)
- NADPH oxidase (1)
- NADPH-Oxidase (1)
- NF-AT (1)
- NFAT (1)
- NFAT in EAE (1)
- NFkappaB (1)
- NK cell (1)
- NKG2D (1)
- NMDA (1)
- NMR (1)
- NMR-Bildgebung (1)
- NMR-imaging (1)
- NTA Lipide (1)
- NTA lipids (1)
- NVP-BEZ235 (1)
- Na/H-Austauscher (1)
- Na/H-exchanger (1)
- Nahrungserwerb (1)
- Nanopartikel (1)
- Natural Language Processing (1)
- Naturschutz (1)
- Natürliche Killerzelle (1)
- Nebennierenrindenkrebs (1)
- Nebennierentumor (1)
- Nebenniererindenkarzinom (1)
- Neisseria meningitidis (1)
- Nepenthes (1)
- Nephroblastoma (1)
- Nervennetz (1)
- Nestgröße (1)
- Network analysis (1)
- Netzhaut (1)
- Netzwerkanalyse (1)
- Netzwerkrekonstruktion (1)
- Netzwerksimulation (1)
- Neurale Stammzellen (1)
- Neuroanatomie (1)
- Neuroanatomy (1)
- Neurobiologie (1)
- Neurobiology (1)
- Neuroblast (1)
- Neuroblastoma (1)
- Neuromelanin (1)
- Neuromuskuläre Synapse (1)
- Neuronale Plastizität (1)
- Neuropeptid (1)
- Neurotransmitter (1)
- Neurotropher Faktor (1)
- Neurovaskuläre Einheit (1)
- Neutrophiler Granulozyt (1)
- Next generation sequencing (1)
- Next-Generation Sequencing (1)
- Nibrin (1)
- Niere (1)
- Nijmegen Breakage Syndrom (1)
- Nijmegen breakage syndrome (1)
- Nitratatmung (1)
- Non-coding RNA (1)
- Nuage (1)
- Nuclear envelope assembly (1)
- Nuclear pore complex (1)
- Nucleinsäuren (1)
- Nucleolus (1)
- Nukleolus (1)
- ODE (1)
- OX40L (1)
- Oberflächenchemie (1)
- Oberflächenplasmonresonanz (SPR) (1)
- Octopamin (1)
- Octopamine (1)
- Oecophylla smaragdina (1)
- Okadasäure (1)
- Onkolyse (1)
- Oozyten (1)
- Organentwicklung (1)
- Organisation (1)
- Organisationsform (1)
- Organogenese (1)
- Orientierung (1)
- Osmolarität (1)
- Osmoregulation (1)
- Ovarielle Alterung (1)
- P60 (1)
- PAC contig (1)
- PAC-Contig (1)
- PAK (1)
- PALM (1)
- PALM stoichiometry (1)
- PCP signaling (1)
- PCP-Signalweg (1)
- PEP:PTS (1)
- PH-Domäne (1)
- PH-domain (1)
- PI3K (1)
- PI3K/Akt Signalweg (1)
- PI3K/Akt pathway (1)
- PI3K/mTOR inhibierung (1)
- PLGA (1)
- Paarungshäufigkeit (1)
- Pachytänspermatozyten (1)
- Pan-Raf-Inhibition (1)
- Paraffin (1)
- Parameterextraktion (1)
- Parental care (1)
- Parkinson (1)
- Parkinson-Krankheit (1)
- Parkinsons Disease (1)
- Partikel (1)
- Pathogenitätsinsel (1)
- Pattern Matching (1)
- Peptid (1)
- Perforine (1)
- Peroxisomale Biogenese Defekte (1)
- Pflanzeninhaltsstoff (1)
- Pflanzliches Insektizid (1)
- Phage-Display (1)
- Phagen-Display (1)
- Phagosom (1)
- Phagozytose (1)
- Pharmacokinetics (1)
- Pharmakogenetik (1)
- Pharmakokinetik (1)
- Pharmazeutische Industrie (1)
- Phosphatidylinositol-3-Kinase (1)
- Phospho-Akt (1)
- Phosphoproteine (1)
- Phosphotransferasesystem (1)
- Photochemie (1)
- Photophysik (1)
- Photoreceptor (1)
- Photorezeptordegeneration (1)
- Photoschädigung (1)
- Phylogenie (1)
- Phytanoyl-CoA-Hydroxylase (1)
- Phytansäure (1)
- Phytoplankton (1)
- Phänotypische Heterogenität (1)
- Pichia pastoris (1)
- Pilze (1)
- Pipeline-Rechner (1)
- Plasma (1)
- Plasmalemma (1)
- Plasmodium (1)
- Plastizität (1)
- Polylactid-co-Glycolid (1)
- Polymerkomplexe (1)
- Polymorphismus (1)
- Polymyositis (1)
- Polypeptide (1)
- Polyploidie (1)
- Pomalidomid (1)
- Ponerinae (1)
- Popdc1 (1)
- Population (1)
- Populationsgenetik (1)
- Porin (1)
- Porine (1)
- Porins (1)
- Positionsklonierung (1)
- Postovulatorische Alterung (1)
- PrP (1)
- Priming (1)
- Primärkultur (1)
- Prion (1)
- Prionprotein (1)
- Promotor <Genetik> (1)
- Prostaglandine (1)
- Prostatakrebs (1)
- Proteasen (1)
- Protein Lipidierungen (1)
- Protein-Protein-Interaktion (1)
- Protein-Protein-Wechselwirkung (1)
- Protein-Serin-Threonin-Ki (1)
- Proteinbiochemie (1)
- Proteindomänen (1)
- Proteindomänenklassifikation (1)
- Proteindynamiken (1)
- Proteinfaltung (1)
- Proteinidentifizierung (1)
- Proteinkinase C (1)
- Proteinkinase CK2 (1)
- Proteinkristallographie (1)
- Proteinmarkierungen (1)
- Proteinmodifikationen (1)
- Proteinsekretion (1)
- Proteinstoffwechsel (1)
- Proteintransport (1)
- Proteintyrosinphosphatase (1)
- Proteom (1)
- Proteomanalyse (1)
- Psychobiologie (1)
- Psychosoziale Beratung (1)
- Psychosoziale Situation (1)
- PyMOL (1)
- Pyrgauchenia (1)
- Pyrgauchenia tristaniopsis (1)
- QUAC1 (1)
- Qinghaosu (1)
- Quantifizierung (1)
- Quantitative Mikroskopie (1)
- R-Typ (1)
- RAD51C (1)
- RAGE (1)
- RAL (1)
- RNA Motivsuche (1)
- RNA delivery (1)
- RNA motiv serach (1)
- RNA-Polymerase I (1)
- RNS-Interferenz (1)
- RNS-Polymerase I (1)
- ROS (1)
- RSK (1)
- RSK2 (1)
- Rab14 (1)
- Raf-Kinasen (1)
- Ratte (1)
- Real-time PCR (1)
- Rechtsmedizin (1)
- Redoxsystem (1)
- Regeneration (1)
- Regenwald (1)
- Registrierung <Bildverarbeitung> (1)
- Regularisierung (1)
- Regulation (1)
- Regulatory Volume Decrease (1)
- Regulon (1)
- Reinigung (1)
- Rekombinantes Protein (1)
- Remission (1)
- Renaturierung <Biochemie> (1)
- Repetitive Exposition (1)
- Repression <Genetik> (1)
- Reproduktion (1)
- Reprogramming (1)
- Retina (1)
- Retinoesaeure (1)
- Retinoschisis (1)
- Retroviraler Gentransfer (1)
- Retroviren (1)
- Rev-NES (1)
- Reversion (1)
- Rezeptor-Liganden-Interaktion (1)
- Rezeptor-Tyrosin-Kinase (1)
- Rezeptormobilität (1)
- Rho GTPasen (1)
- Rho GTPases (1)
- Rhodococcus (1)
- Rhodococcus equi (1)
- Rhodopsin (1)
- Ribonucleoproteine (1)
- Ribosom (1)
- Ribosomenproteine (1)
- Rind (1)
- Risikoberechnung (1)
- Risikostreuung (1)
- Risk estimation (1)
- Robotik (1)
- Rocaglamid (1)
- Räuberdruck (1)
- Räumliches Sehen (1)
- Rückkopplung (1)
- SAP47 (1)
- SH-SY5Y (1)
- SH2-Domänen Bindungsstelle (1)
- SH2-domain binding site (1)
- SH3-Domäne (1)
- SLAC/SLAH (1)
- SMN-Komplex (1)
- SMN-complex (1)
- SNP (1)
- SR protein kinase (1)
- SR-Protein Kinase (1)
- SRPK79D (1)
- STAT (1)
- STAT3 (1)
- STAT6 (1)
- STED (1)
- STED-Mikroskopie (1)
- STR (1)
- Salmonella (1)
- Salmonella enterica (1)
- Salmonellose (1)
- Samenpflanzen (1)
- Sap47 (1)
- Schistosomiasis (1)
- Schließzelle (1)
- Sekundärmetabolit (1)
- Selenit (1)
- Selenoprotein (1)
- Semelparitie (1)
- Seneszenz (1)
- Sensoren (1)
- Sensors (1)
- Sequenzdaten (1)
- Sequenzierung (1)
- Serin-Arginin Proteinkinase (1)
- Serin-Threonin-Kinase (1)
- Serin/Arginin Proteinkinase (1)
- Serinprotease (1)
- Serotonin (1)
- Serotonintransporter (1)
- Serumentzug (1)
- Sex determination (1)
- Sexual development (1)
- Sexualdimorphismus (1)
- Shigella (1)
- Shigella flexneri (1)
- Shikimatsynthese (1)
- Shikimisäure (1)
- Signaling complex (1)
- Signalkomplex (1)
- Signaltransduction (1)
- Simkania (1)
- Sinusknoten (1)
- Sinusknotenbradykardie (1)
- Skleroproteine (1)
- Smad (1)
- Solid-phase microextraction (1)
- Somatische Mutation (1)
- Somitogenese (1)
- Soziale Insekten (1)
- Spaltung (1)
- Spermatozyt (1)
- Spermiogenese (1)
- Spinale Muskelatrophie (1)
- Spinnenseide (1)
- Spleißen (1)
- Split-Ubiquitin-System (1)
- Spumaviren (1)
- Spurenkunde (1)
- Src-Proteine (1)
- Stabilisierung (1)
- Stammzelltransplantation (1)
- Stat3 (1)
- Stat6 (1)
- Sterilität (1)
- Stickstoffmonoxid (1)
- Stickstoffoxid (1)
- Stoffwechselweg (1)
- Strahlensensibilisator (1)
- Strahlensensitivität (1)
- Strahlentherapie (1)
- Structural proteins (1)
- Struktur (1)
- Strukturaufklärung (1)
- Strukturauklärung (1)
- Strukturbiologie (1)
- Strukturproteine (1)
- Superagonist (1)
- Superresolution microscopy (1)
- Support-Vektor-Maschine (1)
- Survival analysis (1)
- Symbionten (1)
- Synaptische Vesikel (1)
- Synthetische Biologie (1)
- Systematik (1)
- Systembiologische Analysen (1)
- Systems Biology (1)
- Säugerzellen (1)
- Säure (1)
- Südostasien (1)
- T cell receptor (1)
- T cells (1)
- T-Lymphozyten (1)
- T-Lymphozyten-Rezeptor (1)
- T-Zell-Lymphom (1)
- T-Zell-Rezeptor (1)
- T-Zelle (1)
- T-cell (1)
- T3SS (1)
- TCSPC (1)
- TEVC (1)
- TGF (1)
- TGF-ß Rezeptoren (1)
- TGF-ß receptors (1)
- TGFß (1)
- TRAF1 (1)
- TWEAK (1)
- Tabak (1)
- Tachyphylaxie (1)
- Tansania (1)
- Taxonomie (1)
- TbH (1)
- Temperaturabhängigkeit (1)
- Temperaturregulierung (1)
- Ternärer Komplex (1)
- Ternärkomplex (1)
- Terpyridinderivate <2 (1)
- Tetrazin (1)
- Text analysis (1)
- Textanalyse (1)
- Theranostik (1)
- Therapy (1)
- Thermographie (1)
- Thiol:Disulfid-Redox-Metabolismus (1)
- Thiole (1)
- Thrombozyten (1)
- Thyme (1)
- Thymian (1)
- Thymol (1)
- Tierart (1)
- Tiere (1)
- Tierpsychologie (1)
- Tobacco (1)
- Toll-like Receptor (1)
- Toll-like-Rezeptoren (1)
- Tonoplast (1)
- Transforming Growth Factor (1)
- Transforming growth factor beta (1)
- Transgene Mäuse (1)
- Transgene Tiere (1)
- Transkription <Genetik> (1)
- Transkriptionsfaktoren (1)
- Transkriptionsregulation (1)
- Transkriptom (1)
- Transkriptomanalyse (1)
- Transmembranprotein (1)
- Transplantation (1)
- Transporter SLC5A3 (1)
- Transporter SLC6A6 (1)
- Transposon (1)
- Trematoden (1)
- Triacylglycerol (1)
- Trimerisation (1)
- Trypanosoma (1)
- Trypanosoma brucei (1)
- Tumor cell migration (1)
- Tumorantigen (1)
- Tumorgenese (1)
- Tumorimmunity (1)
- Tumorimmunität (1)
- Tumorinstability (1)
- Tumorinstabilität (1)
- Tumorzellmigration (1)
- Turgordruck (1)
- Typ III Sekretionssystem (1)
- Tyrosinase (1)
- TßRII-B (1)
- Ubiquitin (1)
- Ubiquitination (1)
- Ukelei (1)
- Ultrastruktur (1)
- Universität Würzburg. Lehrstuhl für Bioinformatik (1)
- Uptake (1)
- Urin (1)
- Urine (1)
- Urogenitalsystem (1)
- Usp28 (1)
- VKORC1L1 (1)
- VMD2 (1)
- Vaccinia Virus (1)
- Vakuole (1)
- Vakzinierung (1)
- Valonia utricularis (1)
- Variantcalling (1)
- Vault (1)
- Venlafaxin (1)
- Ventricaria ventricosa (1)
- Verhaltensanpassung (1)
- Verhaltensökologie (1)
- Vermehrung (1)
- Vernachlässigte Tropenkrankheiten (1)
- Verrechnungszeit (1)
- Verschmelzung (1)
- Vertebraten (1)
- Vertebrates (1)
- Viabilität (1)
- Visualisierung (1)
- Visuelle Wahrnehmung (1)
- Vitamin B6 (1)
- Vitamin D3 (1)
- Vitamin K (1)
- Vitamin-K-Epoxid-Reduktase (1)
- Volumenregulation (1)
- WTX (1)
- Wabe (1)
- Wachslaufen (1)
- Wachstum (1)
- Wachstumsfaktor (1)
- Wasserstoffbrückenbindung (1)
- Wassertransport (1)
- Wassertransport in Pflanzen (1)
- WebLogo (1)
- Weberameisen (1)
- Wechselwirkung (1)
- Wegener's granulomatosis (1)
- Wegener'sche Granulomatose (1)
- Wegeners granulomatosis (1)
- Wegenersche Granulomatose (1)
- Weinbau (1)
- Weinrebe (1)
- Wirbeltiere (1)
- Wirkmechanismus (1)
- Wirtszelle (1)
- Wirtszellen (1)
- Wnt (1)
- Wurzelhalsgalle (1)
- Würzburg / Universität / Lehrstuhl für Bioinformatik (1)
- X-gebundene juvenile Retinoschisis (1)
- X-linked juvenile retinoschisis (1)
- Xenobiotikum (1)
- Xylemdruck (1)
- Xylemdruckmeßsonde (1)
- Yeast-Two-Hybrid-System (1)
- Yellow Cameleon 2.1 (1)
- ZO-2 (1)
- Zahnentwicklung (1)
- Zebrafisch LBR (1)
- Zeit (1)
- Zellen (1)
- Zellkern (1)
- Zelllinie (1)
- Zellmarker (1)
- Zellmarkierung (1)
- Zelluläre Immunität (1)
- Zellvolumen (1)
- Zellwandkanal (1)
- Zellzykluskontrolle (1)
- Zestode (1)
- Zwei-Komponentensystem (1)
- Zwei-Poren Domänen Kaliumkanäle (1)
- Zweidimensionale Elektrophorese (1)
- Zweikomponentensystem (1)
- Zweikomponentensystem <Molekularbiologie> (1)
- Zytogenetik (1)
- Zytokinine (Pflanzenpathogene) (1)
- Zytolsin (1)
- active zone (1)
- adhesion molecules (1)
- affinity purification (1)
- aktive Zone (1)
- aldosterone (1)
- alkylating agent (1)
- alpha-Methylacyl-CoA (1)
- alpha-Oxidation (1)
- alpha-oxidation (1)
- alternative splicing (1)
- alternatives Spleißen (1)
- aluminium (1)
- amacr (1)
- aneugens (1)
- angiogenesis (1)
- angiotensin II type 1a receptor (1)
- anisomycin (1)
- anisotropy (1)
- antibodies (1)
- antibody (1)
- antibody microarray (1)
- antigen delivery (1)
- antigen presentation (1)
- antigen therapy (1)
- antigensearch (1)
- antioxidants (1)
- arthropods (1)
- artificial chromosomes (1)
- arylphorin AFP (1)
- autoimmune disease (1)
- autoimmune diseases (1)
- autoimmunity (1)
- automatisierte Bildanalyse (1)
- autophagy (1)
- bHLH (1)
- bakterielle Flora (1)
- balanced-lethal plasmid system (1)
- bcl-X (1)
- beta A4 (1)
- beta-adrenerge Rezeptoren (1)
- beta-lactamase (1)
- biodiversity (1)
- bioinformatic (1)
- bioinformatics (1)
- biomarker (1)
- biomechanics (1)
- biopharmaceuticals (1)
- biotechnology (1)
- blood (1)
- blood-brain-barrier (1)
- bone (1)
- bone morphogenetic protein (1)
- bone morphogenetic protein-2 (1)
- boolean (1)
- bromoisoxazoline alkaloids (1)
- bromotyrosine alkaloids (1)
- buttonhead (1)
- bvgAS system (1)
- c-type natriuretic peptide (1)
- cAMP (1)
- cAMP / cGMP / cytoskeleton / phosphorylation / protein kinase (1)
- cAMP binding (1)
- cAMP-Bindung (1)
- cDNA-Arrays (1)
- cDNA-arrays (1)
- cGMP (1)
- cancer (1)
- cancer therapy (1)
- capture mechanism (1)
- carabid beetles (1)
- carbon catabolite repression (1)
- cardiogenesis (1)
- cardiovascular remodeling (1)
- case reports (1)
- caspase (1)
- cell cycle control (1)
- cell wall channel (1)
- cestode (1)
- characterisation (1)
- chemische Familienabzeichen (1)
- chromatin (1)
- chromosomal instability disorder (1)
- chromosome 11p13 (1)
- chronic lymphocytic Leukemia (1)
- chronische lymphatische Leukämie (1)
- classical conditioning (1)
- classification (1)
- classification of protein domains (1)
- clastogens (1)
- climbing (1)
- cloning (1)
- cognition (1)
- cold-shock (1)
- colony founding (1)
- colony size (1)
- colorectal cancer (1)
- comb (1)
- conditional knockout mouse (1)
- conformational epitopes (1)
- conservation (1)
- controll mechanism (1)
- corazonin (1)
- cross-linking (1)
- crystal structure (1)
- crystal structure analysis (1)
- cytokeratin (1)
- cytolysin (1)
- dSTORM-Mikroskopie (1)
- dachsous (1)
- data analysis (1)
- dendritic cells (1)
- dendritische Zellen (1)
- deubiquitination (1)
- developmental time (1)
- dielectrophoresis (1)
- differential display PCR (1)
- differentiation (1)
- differenzielle Methylierung (1)
- digging behavior (1)
- disc deseases (1)
- disease control (1)
- dominance (1)
- drones (1)
- drosophila melanogster (1)
- dunce (1)
- dynamic (1)
- e1071 (1)
- eIF-5A (1)
- eIF5A (1)
- electrical measurements (1)
- electron microscopy (1)
- elektrische Messungen (1)
- embryo (1)
- embryonale Stammzelle (1)
- endosome (1)
- endosymbionts (1)
- endosymbiosis (1)
- enteroinvasive (1)
- envelope protein (1)
- enzymatic defense mechanism (1)
- enzymatische Abwehrreaktion (1)
- enzyme (1)
- epitope tagging (1)
- essential (1)
- essential genes (1)
- essentiell (1)
- essentielle Gene (1)
- evolution (1)
- exon trapping (1)
- explorative data analysis (1)
- expression (1)
- expression mapping (1)
- expression pattern (1)
- expression systems (1)
- facial nerve lesion (1)
- familiärer Brustkrebs (1)
- fanconi anemia (1)
- fat (1)
- fatty acid desaturases (1)
- feedback (1)
- fertility (1)
- fibrin (1)
- filamentous hemagglutinin (1)
- fish model system (1)
- fjx (1)
- fjx1 (1)
- flooding disturbance (1)
- flow cytometry (1)
- flow-cytometry (1)
- fluorescence (1)
- fluorescence correlation spectroscopy (1)
- fluorescence quenching (1)
- fly (1)
- foamy virus (1)
- fokale Adhäsionskinase (FAK) (1)
- food deprivation (1)
- foraging (1)
- forensic genetics (1)
- four-jointed (1)
- fusion (1)
- fusion protein (1)
- galectins (1)
- gamete (1)
- gamma-delta T-Lymphozyten (1)
- gamma-delta T-lymphocytes (1)
- gene defect (1)
- gene duplication (1)
- gene identification (1)
- gene ontology (1)
- gene regulation (1)
- gene targeting (1)
- gene therapy (1)
- generalization (1)
- genetic heterogeneity (1)
- genetischer Fingerabdruck (1)
- genomic island (1)
- genomic sequencing (1)
- genomic stability (1)
- genomische Inseln (1)
- genomische Sequenzierung (1)
- genotoxicity (1)
- genotype-phenotype correlation (1)
- genregulatorisches Netzwerk (1)
- geprägte Gene (1)
- germline mosaicism (1)
- glaukoma (1)
- glucocorticoid-receptor modulator (1)
- glutamic acid decarboxylase (1)
- glutathione reductase (1)
- glycoproteins (1)
- guanylate binding proteins (1)
- guanylyl cyclase B receptor (1)
- guanylyl cylcase A (1)
- gynogenesis (1)
- hangover (1)
- heart (1)
- heart failure (1)
- hereditary melanoma (1)
- heterochromatin (1)
- hexamerin (1)
- human (1)
- human IgG1 (1)
- human brain microvascular endothelial cells (1)
- human cytomegalovirus (1)
- human skin (1)
- humane Keimzellen (1)
- humane mesenchymale Stammzellen (1)
- humane mikrovaskuläre Hirnendothelzellen (1)
- humoral and cellular Immune reactions (1)
- humorales und zelluläres Immunsystem (1)
- hyaluronic acid (1)
- hydrogen bonds (1)
- hymenoptera (1)
- hämatopoetisches Mosaik (1)
- iPS Reprogrammierung (1)
- immune deficiency (1)
- immunoconjugate (1)
- immunology (1)
- in situ hybridization (1)
- in vitro Modell (1)
- in vivo (1)
- in-vivo Calcium-Imaging (1)
- individuelles Kennen (1)
- induziert pluripotente Stammzelle (1)
- infection (1)
- inflammation (1)
- innate immune system (1)
- innere Kernmembran (1)
- innocua (1)
- insect identification (1)
- insect-plant interactions (1)
- insects (1)
- insertion duplication mutagenesis IDM (1)
- insulin (1)
- integrase (1)
- integrierte Versorgung (1)
- interactions (1)
- interleukin-13 (1)
- interleukin-4 (1)
- interstitielle Zellen von Cajal (1)
- invasion (1)
- ionotropic glutamate receptors (1)
- iron (1)
- iron responsive elements (1)
- isolates of B. petrii (1)
- isolation (1)
- kardiovaskuläres Remodeling (1)
- kidney (1)
- kinetics (1)
- klassische Konditionierung (1)
- knock-out (1)
- knockout mouse (1)
- konditionale Knockout-Maus (1)
- konditioneller Knockout (1)
- konformationelle Epitope (1)
- künstliche Chromosomen (1)
- lamin B3 (1)
- laminopathy (1)
- lamins (1)
- laser microdissection (1)
- leaf-cutting ants (1)
- lebendgebärende Zahnkarpfen (1)
- left-right asymmetry (1)
- lentiviral transduction (1)
- lentivirale Transduktion (1)
- ligand (1)
- ligand binding domain (1)
- ligand-receptor complex (1)
- links-rechts Asymmetrie (1)
- live-cell (1)
- livebearing poeciliid (1)
- localisation (1)
- longevity (1)
- low molecular weight protein tyrosine phosphatase (1)
- lowland river banks (1)
- lymphomagenesis (1)
- lysosome (1)
- mRNA (1)
- mRNA-Amplifikation (1)
- mRNA-amplification (1)
- macula dystrophy (1)
- macular degeneration (1)
- main binding determinant (1)
- major vault protein (1)
- mammalian cells (1)
- mating frequency (1)
- meiosis . nuclear envelope (1)
- membrane barrier (1)
- memory enhancement (1)
- menschliche Hirnevolution (1)
- mesenchymal stem cell differentiation (1)
- mesenchyme (1)
- metabolic fluxanalysis (1)
- metabolic pathway modeling (1)
- metabolische Fluxanalyse (1)
- metabolome (1)
- metabolomics (1)
- metabonomics (1)
- metatsases (1)
- methods (1)
- methylene blue (1)
- miRNA-Detektion (1)
- miRNS (1)
- mice (1)
- microenvironment (1)
- microfluidics (1)
- microinjection (1)
- microphthalmia associated transcription factor (1)
- microsatellite instability (1)
- mikroskopische Untersuchung (1)
- mineralocorticoid receptor (1)
- mismatch repair (1)
- mismatch repair system (1)
- mitochondrial DNA (1)
- mitochondriale DNA (1)
- module search (1)
- molecular characterization (1)
- molecular diagnostics (1)
- molecular recognition (1)
- molekulare Charakterisierung (1)
- molekulargenetische Charakterisierung (1)
- monocyte (1)
- morphogenesis (1)
- morphology (1)
- motility (1)
- motion (1)
- motoneuron (1)
- mouse (1)
- mouse model (1)
- mousemodell (1)
- multi-adaptor-protein (1)
- multi-species approach (1)
- multiple myeloma (1)
- multipotente Stammzelle (1)
- mushroom body (1)
- mushroombody (1)
- mutants (1)
- mutation rate (1)
- mutualism (1)
- mycolata (1)
- myoblast (1)
- myogenesis (1)
- myristoylation (1)
- nanoparticle (1)
- nanotoxicology (1)
- natural IgM antibodies (1)
- natural language processing (1)
- natürliche IgM-Antikörper (1)
- nest size (1)
- network reconstruction (1)
- network simulation (1)
- neuroblast (1)
- neurodegeneration (1)
- neuroenhancement (1)
- neurogenesis (1)
- neuronal filter (1)
- neuronale Plastizität (1)
- neuronales Filter (1)
- neurone (1)
- neuropeptide (1)
- neurotrophe Faktoren (1)
- nibrin (1)
- nicht-genotrope Steroidwirkungen (1)
- niedermolekulare Protein-Tyrosin-Phosphatasen (1)
- nongenotropic steroid effects (1)
- norA (1)
- nuclear antigen (1)
- nuclear cytosolic translocation (1)
- nuclear envelope assembly (1)
- nuclear myosin (1)
- nuclear pore complexes (1)
- nucleolus (1)
- nucleus (1)
- nukleäre Antigene (1)
- okadaic acid (1)
- olfactory coding (1)
- olfaktorische Codierung (1)
- oligomerization (1)
- oncogene (1)
- oncolytic virotherapy (1)
- onkolytische Virustherapy (1)
- oocyte (1)
- optical Imaging (1)
- optisches Imaging (1)
- organisation (1)
- organogenesis (1)
- orientation (1)
- orphan (1)
- oxidativer Stress (1)
- p110alpha (1)
- p15Ink4b (1)
- p21 activated kinase (1)
- p21-aktivierten Kinase (1)
- p38 (1)
- p53 (1)
- p60 (1)
- pachytene spermatocytes (1)
- pancreatic beta-cells (1)
- paraffin (1)
- paramagnetische Beads (1)
- parameter extraction (1)
- patch-clamp (1)
- pathogenicity island (1)
- pattern conditioning (1)
- peroxisomal biogenesis disease (1)
- peroxisome (1)
- personalisierte Medizin (1)
- phagocytosis (1)
- phagosome (1)
- phenotypic heterogeneity (1)
- phenotypic plasticity (1)
- photoreceptor degeneration (1)
- phylogeny (1)
- phytanic acid (1)
- phytanoyl-CoA Hydroxylase (1)
- phänotypsche Plastizität (1)
- pi3kinase (1)
- plasmalemma (1)
- platelets (1)
- pms2 (1)
- point-of-care (1)
- polymorphonuclear neutrophil (1)
- polymyositis (1)
- polyploidy (1)
- population engineering (1)
- population genetics (1)
- porin (1)
- positional cloning (1)
- potassium channels (1)
- predation pressure (1)
- predictive features (1)
- primary cell culture (1)
- primary cells (1)
- priming (1)
- primäre Zellen (1)
- prion (1)
- prion protein (1)
- prostaglandin (1)
- protein analysis (1)
- protein crystallography (1)
- protein dynamics (1)
- protein interaction (1)
- protein lipidations (1)
- protein modifications (1)
- protein-protein interaction (1)
- proteinkinase C (1)
- proteome (1)
- prädiktive Eigenschaften (1)
- pseudotetraploidisierung (1)
- pseudotetraploidization (1)
- psychosocial aspects (1)
- psychosoziale Aspekte (1)
- purification (1)
- quantitative RT-PCR (1)
- racemase (1)
- radiosensitivity (1)
- receptor mobility (1)
- receptor tyrosin kinase (1)
- receptor tyrosine kinase (1)
- receptor-ligand-interaction (1)
- recombinant protein expression (1)
- recombinant vaccines (1)
- regulation (1)
- regulatorische T Zelle (1)
- regulatory T cell (1)
- regulon (1)
- rekombinant expression (1)
- rekombinante Expression (1)
- rekombinante Proteinexpression (1)
- reproduction (1)
- reproductive skew (1)
- reproductive success (1)
- reproduktiver Erfolg (1)
- resistance to apoptosis (1)
- response regulator (1)
- response-regulator (1)
- retina (1)
- retinoic acid (1)
- retro virus (1)
- retroviral gene transfer (1)
- rfid (1)
- rho0 (1)
- rhodopsin (1)
- ribosomal proteins (1)
- ribosomale Proteine (1)
- risk spreading (1)
- river restoration (1)
- rnaH (1)
- robotics (1)
- rocaglamide (1)
- sFLIM (1)
- sFas (1)
- schwimmende Ameisen (1)
- selenite (1)
- selenoprotein (1)
- semelparity (1)
- senescence (1)
- serine protease (1)
- serine-arginine protein kinase (1)
- serine/arginine protein kinase (1)
- serum (1)
- serum deprivation (1)
- sex chromosomes (1)
- sex determination (1)
- sexual dimorphism (1)
- shikimate pathway (1)
- siRNA (1)
- sifA (1)
- single cell PCR (1)
- single chain (1)
- sinus bradycardia (1)
- small organic osmolytes (1)
- somatic mutations (1)
- somatische Mutationen (1)
- somitogenesis (1)
- spectral karyotyping (1)
- spektrale karyotypisierung (1)
- sperm-dependent parthenogenesis (1)
- spermienabhängige Parthenogenese (1)
- spiders (1)
- spinal muscular atrophy (1)
- splicing (1)
- spodoptera littoralis (1)
- sprouting (1)
- starvation (1)
- stathmin (1)
- statistical evaluation (1)
- statistische Auswertung (1)
- steady-state (1)
- stem cell transplantation (1)
- stem cells (1)
- stress resistance (1)
- structural biology (1)
- structure elucidation (1)
- sugar-conditioned behaviour (1)
- super-resolution (1)
- superagonist (1)
- surface chemistry (1)
- swimming ants (1)
- symbionts (1)
- symbiosis (1)
- synaptic active zone cytomatrix (1)
- synaptische Funktion (1)
- synaptonemal complex (1)
- synergistische Effekte (1)
- synthetic biology (1)
- temperature regulation (1)
- temperature sensitive (1)
- temperatursensitiv (1)
- ternary complex (1)
- tertiary lymphoid tissue (1)
- tertiäres lymphatisches Gewebe (1)
- tex (1)
- thermography (1)
- thermoregulation (1)
- tissue (1)
- tissue engineering (1)
- tonoplast (1)
- transcription factors (1)
- transcription regulation (1)
- transcriptome (1)
- transgenic mice (1)
- transmembrane protein (1)
- transplantation (1)
- treehoppers (1)
- tumor immunology (1)
- tumorigenesis (1)
- turgor pressure (1)
- two component system (1)
- two-component system (1)
- two-componentsystems (1)
- two-cpmponent-system (1)
- two-pore domain potassium channels (1)
- type 1 diabetes mellitus (1)
- ubiquitination (1)
- ultrastructure (1)
- unstructured data (1)
- unstrukturierte Daten (1)
- urogenital system (1)
- vaccine (1)
- vaccines (1)
- vaccinia virus (1)
- vakuoläre Perfusion (1)
- variants of B. petrii (1)
- vasculitis (1)
- vessels (1)
- viniculture (1)
- virulence (1)
- vision (1)
- visiual pattern recognition (1)
- visuelle Mustererkennung (1)
- vitamin B6 synthesis (1)
- vitamin K (1)
- walking (1)
- water transport in plants (1)
- waxrunning (1)
- weaver ants (1)
- werner syndrom (1)
- werner syndrome (1)
- xiphophorus (1)
- xylem pressure (1)
- xylem pressure probe (1)
- yH2AX-Foci (1)
- ydeI (1)
- yeast (1)
- zebrafish LBR (1)
- zinc oxid (1)
- zuckerkonditioniertes Verhalten (1)
- zweigeteilte trivalente T-Zell-aktivierende Antikörperderivate (1)
- zytogenetik (1)
- Ödem (1)
- ß-Galaktosidase (1)
- ß-galactosidase (1)
Institute
- Theodor-Boveri-Institut für Biowissenschaften (377) (remove)
Sonstige beteiligte Institutionen
- Boston Children's Hospital (1)
- Center for Computational and Theoretical Biology (CCTB), Universität Würzburg (1)
- Chemical Biology Laboratory, National Cancer Institue, Frederick (USA) (1)
- Fraunhofer IGB - Institutsteil Würzburg Translationszentrum Regenerative Therapien für Krebs- und Muskuloskelettale Erkrankungen (1)
- Lehrstuhl für Chemie, Brooklyn College, City University of New York, Brooklyn (1)
- Lehrstuhl für Physiologische Chemie (1)
- Lehrstuhl für Translationale Onkologie (1)
- Siemens Corporate Technology, Erlangen (1)
- Technische Hochschule Wildau (1)
- Universitätsklinikum Düsseldorf, Institut für Toxikologie (1)
In der vorliegenden Arbeit konnte die essentielle Beteiligung von Caspasen im Zelltodmodell der AKR 2B-Mausfibroblasten nachgewiesen und ihre Aktivitäten charakterisiert werden. AKR 2B-Mausfibroblasten stellen eine subklonierte und gut charakterisierte Zellinie dar, in der durch Entzug des Serums der Zelltod induziert wird. Während des Zelltods sterben innerhalb von 6h etwa 50 Prozent einer dichtearretierten Kultur. Die überlebenden Zellen bleiben von diesem Mangelzustand für mindestens weitere 48h unbeeinflußt, benötigen aber zum Überleben eine Proteinneusynthese. Der Zelltod zeigt für eine Apoptose typische morphologische Veränderungen der Zelle, obwohl apoptotische Charakteristika, wie die oligonukleosomale Fragmentierung der DNA oder die Aufnahme der zerfallenen Zelle durch benachbarte Zellen, ausbleiben. Mittels unterschiedlicher Methoden konnte die Expression von mRNA aller für den apoptotischen Prozeß bekannten relevanten Caspasen in den AKR 2B-Mausfibroblasten nachgewiesen werden. Die Caspasen-1, -2, -3, -6 und -9 liegen in ihrer zymogenen Form konstitutiv in den Zellen vor. Mit Ausnahme der Caspase-9 konnte die durch Serumentzug induzierte Spaltung dieser Caspasen in Untereinheiten und somit ihre Aktivierung nicht detektiert werden. Die wesentliche Beteiligung dieser Cystein-Proteasen wurde jedoch durch den protektiven Effekt spezifischer Inhibitoren und den Nachweis ihrer spezifischen Aktivität bestimmt. Die Charakterisierung dieser enzymatischen Aktivitäten lieferte Hinweise zur Identität der aktivierten Caspasen. Neben einer konstitutiven VEIDase- und IETDase-Aktivität wird 3h nach Entzug des Serums eine DEVDase maximal aktiviert. Das Gemisch an Caspase-Aktivitäten wird durch eine DEVDase dominiert. Diese Aktivität wird zum größten Teil durch nur ein Enzym gestellt, wie durch eine Affinitätsmarkierung und 2D-Gelelektrophorese gezeigt wurde. KM- und Ki-Wert-Bestimmungen der DEVDase deuten darauf hin, daß dieses Enzym typische Effektoreigenschaften, wie die der Caspase-3, besitzt. Daneben werden Lamine während des Zelltods in AKR 2B-Mausfibroblasten abgebaut, was auf eine aktivierte Caspase-6 hinweist. Die enzymatischen Charakteristika dieser Protease weichen aber von den in AKR 2B-Mausfibroblasten festgestellten Werten deutlich ab, so daß man ihr nur eine untergeordnete Rolle im Caspasen-Gemisch zuordnen kann. Eine mehrfach chromatographische Reinigung der Aktivität bietet die beste Grundlage für eine anschließende Sequenzierung der Caspase mit dem Ziel ihrer Identifizierung. Durch die Expression des viralen Caspase-Inhibitors CrmA konnte eine tragende Rolle der Caspase-8 und damit des Rezeptor-vermittelten Weges in der Initiierung des apoptotischen Programms in AKR 2B-Mausfibroblasten ausgeschlossen werden. Gleiches gilt für den mitochondrial-vermittelten Weg, für dessen Beteiligung, bis auf die Spaltung der Caspase-9, keine Hinweise vorliegen. Der Weg, der zur Aktivierung der DEVDase führt, ist Ziel gegenwärtiger Untersuchungen. Substanzen, die Signalwege aktivieren PDGF-BB, TPA, Forskolin und 8Br-cAMP) oder auch Substanzen, deren Verbindung zu Signalwegen noch weitgehend offen ist, schützen die Zellen vor dem Zelltod. Der protektive Effekt dieser Signalwege konzentriert sich in einem Konvergenzpunkt, der auf noch unbekannte Weise die Aktivierung der Effektor-Caspasen blockiert. Die Identität dieses Konvergenzpunktes und von ihm ausgehenden protektiven Weges ist Ziel weiterer Untersuchungen. So ist es möglicherweise dieser Weg, der zum Überleben von 50 Prozent der AKR 2B-Mausfibroblasten während des Serumentzugs wesentlich beiträgt.
Altersassoziierte und strahleninduzierte Veränderungen des genomweiten DNA-Methylierungs-Profils
(2018)
Der Prozess des Alterns ist ein komplexer multifaktorieller Vorgang, der durch eine sukzessive Verschlechterung der physiologischen Funktionen charakterisiert ist. Ein hohes Alter ist der Hauptrisikofaktor für die meisten Krankheiten, einschließlich Krebs und Herz-Kreislauf-Erkrankungen. Das Verständnis der epigenetischen Mechanismen, die in den Prozess des Alterns involviert sind, könnte zur Entwicklung pharmakologischer Interventionen beitragen, die nicht nur die Lebenserwartung erhöhen, sondern auch den Beginn des altersassoziierten funktionellen Abbaus verzögern könnten. Durch die Langzeit-Kultivierung primärer humaner Fibroblasten wurde ein in vitro Modell für das Altern etabliert, das die Identifizierung altersassoziierter DNA-Methylierungs-Veränderungen ermöglichte. Die in vitro Alterung konnte mit einer globalen Hypomethylierung und einer erhöhten DNA-Methylierung der ribosomalen DNA assoziiert werden. Darüber hinaus konnten DNA-Methylierungs-Veränderungen in Genen und Signalwegen, die für das Altern relevant sind, und ein erhöhtes epigenetisches Alter nachgewiesen werden.
Das in vitro Modell für das Altern wurde verwendet, um neben den direkten Effekten ionisierender Strahlung auf die DNA-Methylierung auch deren Langzeit-Effekte zu untersuchen. Die Strahlentherapie ist ein entscheidendes Element der Krebstherapie, hat aber auch negative Auswirkungen und kann unter anderem das Risiko für die Entwicklung eines Zweittumors erhöhen. Bei externer Bestrahlung wird neben dem Tumor auch gesundes Gewebe ionisierender Strahlung ausgesetzt. Daher ist es wichtig zu untersuchen, wie Zellen mit intakten DNA-Reparatur-Mechanismen und funktionierenden Zellzyklus-Checkpoints durch diese beeinflusst werden. In der frühen Phase der DNA-Schadensantwort auf Bestrahlung wurden in normalen Zellen keine wesentlichen DNA-Methylierungs-Veränderungen beobachtet. Mehrere Populations-Verdoppelungen nach Strahlenexposition konnten dagegen eine globale Hypomethylierung, eine erhöhte DNA-Methylierung der ribosomalen DNA und ein erhöhtes epigenetisches Alter detektiert werden. Des Weiteren zeigten Gene und Signalwege, die mit Krebs in Verbindung gebracht wurden, Veränderungen in der DNA-Methylierung. Als Langzeit-Effekte ionisierender Strahlung traten somit die mit der in vitro Alterung assoziierten DNA-Methylierungs-Veränderungen verstärkt auf und ein epigenetisches Muster, das stark an das DNA-Methylierungs-Profil von Tumorzellen erinnert, entstand. Man geht davon aus, dass Veränderungen der DNA-Methylierung eine aktive Rolle in der Entwicklung eines Tumors spielen. Die durch ionisierende Strahlung induzierten DNA-Methylierungs-Veränderungen in normalen Zellen könnten demnach in die Krebsentstehung nach Strahlenexposition involviert sein und zu dem sekundären Krebsrisiko nach Strahlentherapie beitragen. Es ist bekannt, dass Patienten unterschiedlich auf therapeutische Bestrahlung reagieren. Die Ergebnisse dieser Arbeit weisen darauf hin, dass die individuelle Sensitivität gegenüber ionisierender Strahlung auch auf epigenetischer Ebene beobachtet werden kann.
In einem zweiten Projekt wurden Gesamtblutproben von Patienten mit Werner-Syndrom, einer segmental progeroiden Erkrankung, und gesunden Kontrollen analysiert, um mit dem vorzeitigen Altern in Verbindung stehende DNA-Methylierungs-Veränderungen zu identifizieren. Werner-Syndrom konnte nicht mit einer globalen Hypomethylierung, jedoch mit einer erhöhten DNA-Methylierung der ribosomalen DNA und einem erhöhten epigenetischen Alter assoziiert werden. Das vorzeitige Altern geht demzufolge mit spezifischen epigenetischen Veränderungen einher, die eine Beschleunigung der mit dem normalen Altern auftretenden DNA-Methylierungs-Veränderungen darstellen.
Im Rahmen dieser Arbeit konnte die Bedeutung epigenetischer Mechanismen im Prozess des Alterns hervorgehoben werden und gezeigt werden, dass sowohl exogene Faktoren, wie ionisierende Strahlung, als auch endogene Faktoren, wie das in Werner-Syndrom-Patienten mutiert vorliegende WRN-Gen, altersassoziierte DNA-Methylierungs-Veränderungen beeinflussen können.
Die postovulatorische Alterung sowie die ovarielle Alterung konnten bei der Anwendung assistierter Reproduktionstechniken (ARTs) als entscheidende Faktoren identifiziert werden, die den Reproduktionserfolg nachhaltig beeinträchtigen. Die postovulatorische Alterung tritt ein, sobald die reife Eizelle nicht mehr innerhalb ihres physiologischen Zeitfensters befruchtet wird. Die ovarielle Alterung beschreibt hingegen die Abnahme des Follikel-Vorrats mit zunehmendem Alter des weiblichen Individuums bzw. des Ovars. Sowohl die postovulatorische Alterung als auch die ovarielle Alterung führen u.a. zu einer reduzierten Oozytenqualität und einer geringeren Blastozystenrate. Die Zielsetzung dieser Arbeit bestand darin, den Einfluss der postovulatorischen Alterung und der ovariellen Alterung im Holstein-Rind (Bos taurus) auf die DNA-Methylierung entwicklungsrelevanter Gene in Eizellen und Embryonen zu untersuchen. Aus Schlachthof-Ovarien wurden Antralfollikeln unterschiedlicher Größe (<2 mm, 3-5 mm und >6 mm) isoliert. Eizellen aus Follikeln der Größe 3-5 mm wurden für 24h (physiologisch) und 48h (gealtert) in vitro gereift (IVM). Die gereiften Oozyten wurden anschließend in vitro fertilisiert und Embryonen im 4-6 Zellstadium generiert. Sowohl in den unreifen Eizellen aus Antralfollikeln unterschiedlicher Größe als auch in den gereiften Oozyten und den Embryonen wurde die Promotormethylierung der Gene bH19, bSNRPN, bZAR1, bDNMT3A, bOCT4, bDNMT3Lo und bDNMT3Ls analysiert. Zur Untersuchung der ovariellen Alterung wurden mittelgroßen Antralfollikel aus Ovarien lebender Rinder (in vivo) unterschiedlichen Alters (9-12 Monate, 3-7 Jahre und 8-11 Jahre) gewonnen. In den daraus isolierten unreifen Eizellen wurde die DNA-Methylierung der Promotorregionen der Gene bTERF2, bREC8, bBCL-XL, bPISD, bBUB1, bDNMT3Lo, bH19 und bSNRPN bestimmt. Als Methode zur Analyse der Promotormethylierung wurde die Limiting Dilution Bisulfit-Sequenzierung angewendet.
In unreifen Eizellen aus Antralfollikeln unterschiedlicher Größe (<2 mm, 3-5 mm und >6 mm) konnte ein erhöhtes Auftreten abnormal methylierter Allele in den geprägten Genen bH19 und bSNRPN von Eizellen kleiner Follikel (<2 mm) identifiziert werden. Dieses Ergebnis könnte eine mögliche Ursache einer bereits bekannten und mehrfach beschriebenen geringeren Entwicklungskompetenz von Eizellen kleiner Follikel (<2 mm) auf epigenetischer Ebene darstellen.
Die verlängerte Reifungsdauer der IVM-Eizellen hatte eine signifikante Hypermethylierung in der Promotorregion des Gens DNMT3Lo von 48h-gereiften Eizellen zur Folge. Beim Übergang von 48h-gereiften Eizellen zum Embryo konnte eine signifikante Hypomethylierung von CpG7 des stammzellspezifischen Transkripts DNMT3Ls beobachtet werden. Diese CpG-Stelle wies ebenfalls einen signifikanten Anstieg von CpGs mit nicht-eindeutigem Methylierungszustand in unreifen Eizellen mit steigender Follikelgröße auf. Da sich die CpG-Position innerhalb eines Sequenz-Motivs einer Bindungsstelle des Transkriptionsfaktors CREB befindet, könnten die Methylierungsdaten auf eine Interaktion zwischen dem Transkriptionsfaktor CREB und der DNA-Methylierung während der Entwicklung und Reifung der Eizelle sowie der Transition von der Eizelle zum Embryo hindeuten.
Die DNA-Methylierungsprofile der untersuchten Gene in unreifen Eizellen aus Kühen unterschiedlichen Alters (9-12 Monate, 3-7 Jahre und 8-11 Jahre) wiesen keine signifikanten Unterschiede zwischen den Altersgruppen auf. Die ovarielle Alterung bei Rindern zwischen 9 Monaten und 11 Jahren zeigte damit keinen Effekt auf die DNA-Methylierung der untersuchten Promotorregionen der Gene bTERF2, bREC8, bBCL-XL, bPISD, bBUB1, bDNMT3Lo, bH19 und bSNRPN.
Nach einer simulierten postovulatorischen Alterung durch eine in vitro Reifung für 48h konnte eine Veränderung der DNA-Methylierung der Oozyten-spezifischen (DNMT3Lo) und Stammzell-spezifischen (DNMT3Ls) Promotoren des katalytisch inaktiven Cofaktors von DNMT3A, DNMT3L, beobachtet werden. Die veränderte DNA-Methylierung von DNMT3Ls tritt dabei erst im frühen Embryo in Erscheinung und interagiert vermutlich mit dem Transkriptionsfaktor CREB. Die Veränderungen von DNMT3Lo in Eizellen und DNMT3Ls in den daraus generierten Embryonen lässt vermuten, dass es sich hierbei um eine dynamische Anpassung des Embryos auf äußere Umweltbedingungen der Eizelle über die Methylierung der DNA handelt.
Die Entwicklung von Ethanoltoleranz ist ein Indikator für eine mögliche Abhängigkeit von Alkohol. Der genaue molekulare Mechanismus der Ethanoltoleranzentwicklung ist jedoch nicht bekannt. Drosophila ermöglicht die molekulare und phänotypische Untersuchung von verschiedenen Mutanten mit veränderter Toleranz und kann so zu einem besseren Verständnis beitragen. Die hangAE10 Mutante entwickelt eine reduzierte Ethanoltoleranz, wobei dieser Phänotyp auf Defekte in der zellulären Stressantwort zurückzuführen ist. Für ein besseres Verständnis, in welchen molekularen Mechanismen bzw. Signalwegen HANG wirkt, wurde die Funktion des Proteins auf zellulärer Ebene analysiert und mögliche Zielgene charakterisiert. Die auffällige Proteinstruktur von HANG spricht für eine Interaktion mit Nukleinsäuren. Immunhistochemische Analysen von ektopisch exprimiertem Hangover Protein ergaben, dass dieses nicht mit der DNA co-lokalisiert und auch nicht an polytänen Chromosomen nachgewiesen werden kann. Die ektopische Expression von HANG in Speicheldrüsenzellen zeigte eine punktförmige Verteilung des Proteins innerhalb des Zellkerns. Dieses punktförmige Expressionsmuster wird häufig in RNA-bindenden Proteinen gefunden. Deshalb wurden Co-Lokalisationsstudien von HANG mit Markern für RNAmodifizierende Proteine durchgeführt. Dabei wurde keine Interaktion mit verschiedenen Markerproteinen des Spleißapparates gefunden. Mithilfe von in vitro Experimenten konnte aber die Bindung von RNA an bestimmten Hangover Proteinbereichen nachgewiesen werden Diese Ergebnisse legen nahe, dass HANG eine RNA-regulierende Funktion hat. In einem cDNA Microarray Experiment wurde das Gen dunce als mögliches Zielgen von Hangover identifiziert. Das Gen dunce kodiert für eine Phosphodiesterase, welche spezifisch cAMP hydrolysiert. Zur Bestätigung der cDNA Microarray Experimente wurden die dnc Transkriptunterschiede in Wildtyp und hangAE10 Mutante mithilfe von semiquantitativer RT-PCR für jede der vier Gruppen untersucht. Dabei konnte eine Reduktion der dncRMRA-Transkriptgruppe in hangAE10 Mutanten nachgewiesen werden. Aufgrund dieser Ergebnisse wurde die dncRMRA -spezifische dncΔ143 Mutante hergestellt und auf Verhaltensebene analysiert. Die Experimente zeigten, dass sowohl dnc1, als auch die dncΔ143 Mutante eine reduzierte Ethanoltoleranz und Defekte in der zellulären Stressantwort aufweisen. Für die Rettung der reduzierten Toleranz von hangAE10 und dncΔ143 in dncRMRA-spezifischen Neuronen wurde die dncRMRA Promotor- GAL4 Linie hergestellt. Die reduzierte Ethanoltoleranz der dncΔ143 Mutanten konnte über die Expression von UAS-dnc mit der dncRMRA-GAL4 Linie auf Wildtyp Level gerettet werden. Die reduzierte Toleranz der hangAE10 Mutante konnte mithilfe derselben GAL4 Linie verbessert werden. Dies beweist, dass in beiden Mutanten dieselben Zellen für die Entwicklung von Ethanoltoleranz benötigt werden und sie wahrscheinlich in der gleichen Signaltransduktionskaskade eine Funktion haben. Aufgrund der Anfälligkeit der UAS/ GAL4 Systems gegenüber Hitze war es außerdem nicht möglich die Defekte der zellulären Stressantwort von dncΔ143 bzw. hangAE10 Fliegen zu retten. Die Rettung der reduzierten Ethanoltoleranz der dcnΔ143 Mutante führte außerdem zu der Vermutung, dass die cAMP Regulation eine wichtige Funktion bei der Ethanoltoleranzentwicklung hat. Über die Expression von cAMP-regulierenden Proteinen in dncRMRA-spezifischen Neuronen wurde der Einfluss von cAMP bei Ethanol-induziertem Verhalten überprüft. Bei der Überexpression von dunce und rutabaga konnte weder eine Veränderung für die Ethanolsensitivität, noch für die Toleranzentwicklung festgestellt werden. Eine Erklärung hierfür wäre, dass Veränderungen in der cAMP Konzentration über Rückkopplungsmechanismen zwischen Dunce und Rutabaga ausgeglichen werden können. Für eine genauere Aussage müsste jedoch die cAMP Konzentration in diesen Fliegen gemessen werden. Die Überexpression von pka- in dncRMRA spezifischen Zellen führt zu einer erhöhten Ethanolresistenz. Das bedeutet, dass die Modulation der cAMP Konzentration durch dunce und rutabaga in dncRMRA spezifischen Zellen keinen Einfluss auf Ethanol-induziertes Verhalten hat, wohingegen die Stärke der cAMP vermittelten Signalverarbeitung über die cAMP-abhängige PKA zu Veränderungen im Verhalten führt. Für Mutanten des cAMP Signalweges ist außerdem bekannt, dass sie Defekte im olfaktorischen Lernen bzw. Gedächtnis aufweisen. Deshalb wurden die dncΔ143, dnc1 und hangAE10 Mutanten in diesem Paradigma getestet. Sowohl dnc1, als auch dncΔ143 Fliegen zeigten einen reduzierten Performance Index für das zwei und 30 Minuten Gedächtnis. Nach 180 Minuten verhielten sich die dncΔ143 Mutanten nicht mehr unterschiedlich zum Wildtyp, die dnc1 Mutante zeigte jedoch immer noch eine Reduktion des Performance Index im Vergleich zur Kontrolle. Demnach ist in dncΔ143 Mutanten nur das Kurzzeitgedächtnis betroffen, wohingegen hangAE10 Mutanten keine Reduktion des Performance Index für das olfaktorische Kurzzeitgedächtnis aufweisen. Die unterschiedlichen Ergebnisse der beiden Mutanten in der Gedächtnisentwicklung deuten außerdem daraufhin, dass Lernen und Gedächtnis in dncΔ143 und hangAE10 Mutanten von der Toleranzentwicklung unabhängig über unterschiedliche cAMP-abhängige Signaltransduktionskaskaden reguliert werden.
Die Kernhülle ist eine hoch spezialisierte Membran, die den eukaryotischen Zellkern umgibt. Sie besteht aus der äußeren und der inneren Kernmembran, die über die Kernporenkomplexe miteinander verbunden werden. Die Kernhülle reguliert nicht nur den Transport von Makromolekülen zwischen dem Nukleoplasma und dem Zytoplasma, sie dient auch der Verankerung des Chromatins und des Zytoskeletts. Durch diese Interaktionen hilft die Kernhülle, den Zellkern innerhalb der Zelle und die Chromosomen innerhalb des Zellkerns zu positionieren, und reguliert dadurch die Expression bestimmter Gene. In höheren Eukaryoten durchlaufen sowohl die Kernhülle, als auch die Kernporenkomplexe während der Zellteilung strukturelle Veränderungen. Zu Beginn der Mitose werden sie abgebaut, um sich am Ende der Mitose in den Tochterzellen erneut zu bilden. Die molekularen Mechanismen, die zum Wiederaufbau der Kernhülle führen, sind kaum geklärt. Ein geeignetes System, um bestimmte Ereignisse bei der Kernhüllenbildung zu untersuchen, liefert das zellfreie System aus Xenopus Eiern und Spermienchromatin (Lohka 1998). Es konnte bereits früher gezeigt werden, dass es im Eiextrakt von Xenopus laevis mindestens zwei verschiedene Vesikelpopulationen gibt, die zur Bildung der Kernhülle beitragen. Eine der Vesikelpopulationen bindet an Chromatin, fusioniert dort und bildet eine Doppelmembran. Die andere Vesikelpopulation bindet an die bereits vorhandene Doppelmembran und sorgt für die Ausbildung der Kernporenkomplexe. Ziel dieser Arbeit war es, diese beiden Membranfraktionen zu isolieren und zu charakterisieren, wobei das Hauptinteresse in der porenbildenden Membranfraktion lag. Durch Zentrifugation über einen diskontinuierlichen Zuckergradienten konnten die Membranvesikel in zwei verschiedene Vesikelfraktionen aufgetrennt werden. Eine Membranfraktion konnte aus der 40%igen Zuckerfraktion („40% Membranfraktion“) isoliert werden, die andere aus der 30%igen Zuckerfraktion („30% Membranfraktion“). Die verschiedenen Membranfraktionen wurden zu in vitro Kernen gegeben, in denen die Kernporen durch vorausgegangene Bildung von Annulate Lamellae depletiert worden waren. Nach Zugabe der 30% Membranfraktion konnte die Bildung von funktionalen Kernporen beobachtet werden. Im Gegensatz dazu zeigte die 40% Membranfraktion keine porenbildenden Eigenschaften. Unter Verwendung eines vereinfachten Systems, bestehend aus Zytosol, Spermienchromatin und den Membranen, wurde gezeigt, dass die 40% Membranfraktion an Chromatin bindet und ausreichend ist, um eine kontinuierliche Doppelmembran ohne Kernporen zu bilden. Die 30% Membranfraktion besitzt keine Chromatinbindungseigenschaften und wird aktiv entlang von Mikrotubuli zu den porenlosen Kernen transportiert. Dort interagiert sie mit der chromatingebundenen 40% Membranfraktion und induziert die Porenbildung. Nach dem Vergleich der Proteinzusammensetzung der beiden Membranfraktionen, konnte das Major Vault Protein (MVP) nur in der porenbildenden Membranfraktion gefunden werden. MVP ist die Hauptstrukturkomponente der Vault-Komplexe, einem Ribonukleo-proteinpartikel, der in den meisten eukaryotischen Zellen vorhanden ist (Kedersha et al., 1991). Bemerkenswerterweise wird über die Funktion der Vault-Komplexe, trotz ihrer übiquitären Expression und ihrem Vorkommen in fast allen eukaryotischen Zellen, immer noch diskutiert. Um mehr über die Funktion und die Lokalisation der Vaults/MVP zu lernen, wurden die Vaults in Anlehnung an die Methode von Kedersha und Rome (1986) aus Xenopus Eiern isoliert. Zusätzlich wurde rekombinantes Xenopus MVP hergestellt, das unter anderem für die Produktion von Antikörpern in Meerschweinchen verwendet wurde. Um herauszufinden, ob die Anwesenheit von MVP in der 30% Membranfraktion in direktem Zusammenhang mit deren porenbildender Eigenschaft steht, wurden gereinigte Vault-Komplexe oder rekombinantes MVP, das alleine ausreichend ist, um in sich zu den charakteristischen Vault-Strukturen zusammenzulagern, zu porenlosen Kernen gegeben. Sowohl gereinigte Vault-Komplexe, als auch rekombinantes MVP waren in der Lage in den porenlosen Kernen die Bildung von funktionalen Kernporen zu induzieren. Untersuchungen zur Lokalisation von MVP zeigten, dass MVP teilweise an der Kernhülle und den Kernporenkomplexen lokalisiert, während der Großteil an MVP zytoplasmatisch vorliegt. Dies sind die ersten Daten, die Vaults/MVP mit der Kernporenbildung in Verbindung bringen. Deshalb bietet diese Arbeit die Grundlage, um diese unerwartete Rolle der Vaults in Zukunft genauer zu charakterisieren.
Die Isolierung von Phagosomen ermöglicht die biochemische Analyse der Phagosomen-Zusammensetzung sowie der an der Phagosomenreifung beteiligten Moleküle. Deshalb wurde im Rahmen dieser Promotionsarbeit eine Methode entwickelt, die es ermöglicht, Bakterien-enthaltende Phagosomen zu isolieren. Diese Methode erzielt im Vergleich zu anderen in der Literatur beschriebenen Methoden eine gute Ausbeute (fast 40 Prozent) und vor allem eine höhere Reinheit an Bakterien-enthaltenden Phagosomen. So besteht keine Kontamination mit Teilen des Golgi-Apparates und nur eine sehr geringe Kontamination mit endosomalen und lysosomalen Proteinen sowie Plasmamembranbestandteilen. Allerdings wurde eine Kontamination mit Mitochondrien und ER detektiert. Letzteres muss nicht unbedingt eine Kontamination darstellen, sondern könnte ein wichtiger Bestandteil von Phagosomen sein. Afipia felis ist ein Gram-negatives Bakterium, das für einige Fälle der Katzen-Kratz Krankheit verantwortlich ist. Es kann innerhalb von Makrophagen überleben und sich vermehren. Die genaue Kompartimentierung der Afipia felis-enthaltenden Phagosomen in Makrophagen war allerdings unbekannt und sollte deshalb in der vorliegenden Promotionsarbeit analysiert werden. Ovalbumin Texas Red, mit dem Lysosomen vor der Infektion markiert wurden, gelangt nicht in die Afipien-enthaltenden Phagosomen, und die Afipien-enthaltenden Phagosomen sind auch nicht zugänglich für Ovalbumin Texas Red, mit dem das gesamte endozytische System nach der etablierten Infektion markiert wurde. Außerdem sind etablierte, isolierte Afipia felis-enthaltende Phagosomen nur in geringem Umfang positiv für spät endosomale/lysosomale Markerproteine und negativ für früh endosomale Markerproteine. Die Afipien, die ein nicht endozytisches Kompartiment etablieren, werden vom Makrophagen in ein EEA1-negatives Kompartiment aufgenommen, das auch zu späteren Zeitpunkten negativ für LAMP-1 ist. Nur die circa 30 Prozent der Afipien, die sich in einem Kompartiment befinden, das zum endozytischen System gehört, gelangen nach der Aufnahme durch den Makrophagen in ein EEA1-positives Kompartiment, das zu einem späteren Zeitpunkt positiv für LAMP-1 wird. Tötung der Afipien oder Opsonisierung mit Antikörpern vor der Infektion normalisiert die Reifung der Afipia felis-enthaltenden Phagosomen in den J774E-Makrophagen. Somit konnte nachgewiesen werden, dass die Mehrzahl der Phagosomen (70 Prozent), die Afipia felis enthalten, nicht zum endozytischen System gehören. Diese ungewöhnliche Kompartimentierung besteht bereits bei der Aufnahme und kann nur von lebenden Afipien etabliert werden. Rhodococcus equi ist ein Gram-positives Bakterium, das unter anderem Bronchopneumonien beim Fohlen verursacht. Aber auch Menschen und andere Säugetiere sind von Infektionen mit R. equi betroffen. Die Fähigkeit der Rhodokokken, innerhalb der Makrophagen zu überleben und sich zu vermehren, ist mit dem Vorhandensein eines 85 kbp Plasmids assoziiert. Da über die genaue Kompartimentierung von R. equi im Mausmakrophagen wenig bekannt war, und der Frage, ob es einen Unterschied zwischen der Kompartimentierung von R. equi(+)- und R. equi(-)-enthaltenden Phagosomen gibt, noch nicht nachgegangen wurde, war beides Thema dieser Promotionsarbeit. Dabei zeigt sich, dass R. equi(-)-enthaltende Phagosomen wesentlich stärker mit den spät endosomalen/lysosomalen Markerproteinen vATPase und LAMP-1 assoziiert sind sowie eine höhere ß-Galaktosidase-Aktivität aufweisen als die R. equi(+)-enthaltenden Phagosomen. Da sowohl die isolierten R. equi(-)- als auch die R. equi(+)-enthaltenden Phagosomen mit dem früh endosomalen Markerprotein rab5 assoziiert sind, ist anzunehmen, dass Rhodokokken unabhängig vom Vorhandensein des 85 kbp Plasmids in der Lage sind, die Phagosomenreifung zu verzögern. Aber R. equi(-) kann die Reifung zwar verzögern, aber letztendlich nicht verhindern. Wahrscheinlich reifen die Phagosomen, die R. equi(-) enthalten, zu einem späteren Zeitpunkt zu Phagolysosomen, wohingegen R. equi(+) ein ungewöhnliches Kompartiment etabliert und dadurch die Phagosomenreifung endgültig zu verhindern scheint. Somit ist anzunehmen, dass mindestens ein vom 85 kbp Plasmid kodiertes Molekül für die Etablierung dieses ungewöhnlichen, R. equi(+)-enthaltenden Kompartimentes, verantwortlich ist. Da eine Infektion mit Rhodococcus equi zytotoxisch für die infizierte Zelle sein kann, wurde die von den Rhodokokken vermittelte Zytotoxizität näher analysiert. Die in dieser vorliegenden Promotionsarbeit dargestellten Ergebnisse zeigen deutlich, dass nur die Plasmid-enthaltenden Rhodokokken zur Nekrose, aber nicht zur Apoptose ihrer Wirtszellen führen, während R. equi(-) keinen Einfluss auf die Vitalität ihrer Wirtszellen haben. Dieses Phänomen ist allerdings abhängig vom Wirtszelltyp. So sind R. equi(-) als auch R. equi(+) für humane Monozyten nur geringfügig zytotoxisch.
In der vorliegenden Arbeit wurden die Mechanismen der Hochdosis-GC-Pulstherapie im Zusammenhang mit akuten Schüben von MS-Patienten anhand des Tiermodells der MS, der Experimentellen Autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE), untersucht. Die EAE wurde in C57Bl/6 Mäusen und diversen GR-defizienten Mäusen durch Immunisierung mit Myelinoligodendrozytenglykoprotein (MOG35-55) induziert. Es konnte gezeigt werden, dass die Gabe von Dexamethason (Dex) den Krankheitsverlauf dosisabhängig verbessert. Die Untersuchung heterozygoter GR Knock-out Mäuse und hämatopoetischer Stammzellchimären verdeutlichte, dass der zytosolische GR (cGR) für die Vermittlung therapeutischer GC-Effekte von sehr großer Bedeutung ist. Der Einsatz zelltyp-spezifischer GR-defizienter Mäuse zeigte auf zellulärer Ebene, dass für die Vermittlung von GC-Wirkungen die Expression des GR vor allem in T-Zellen unabdingbar ist, wohingegen die GR-Expression in myeloiden Zellen in diesem Kontext keine Bedeutung hat. Durch die Analyse des molekularen Mechanismus konnte festgestellt werden, dass diese Effekte durch Apoptoseinduktion und Herunterregulieren von Adhäsionsmolekülen in peripheren, aber nicht ZNS-residenten T-Zellen erzielt wurden. Überdies wurde ersichtlich, dass Dex die T-Zellmigration in das ZNS verhinderte. Diese Beobachtung unterstützt die Hypothese, dass Dex durch Apoptoseinduktion und Immunmodulation hauptsächlich auf periphere T-Zellen wirkt und somit den ständigen Influx neuer Immunzellen in das ZNS verhindert. Ferner konnte in dieser Arbeit gezeigt werden, dass die therapeutische Gabe hochdosierten Methylprednisolons (MP) in diesem EAE-Modell ebenfalls zu einer dosisabhängigen Verbesserung der EAE führte. Diese beruhte auf einer reduzierten Lymphozyteninfiltration in das ZNS, war allerdings im Vergleich zur Dex-Therapie aufgrund geringerer Wirkpotenz weniger stark ausgeprägt. Im Gegensatz dazu führte die präventive MP-Applikation zu einem verstärkten EAE-Verlauf, der nach der Beeinflussung peripherer, hämatopoetischer Immunzellen auf eine verstärkte Proliferation autoreaktiver T-Zellen zurückzuführen ist. Im weiteren Verlauf der vorliegenden Arbeit wurde als möglicher Ersatz für die Hochdosis-GC-Pulstherapie eine nicht-steroidale, antiinflammatorische Substanz im chronischen EAE-Modell der C57Bl/6 Maus etabliert. Erste tierexperimentelle Untersuchungen mit Compound A (CpdA) offenbarten eine lediglich geringe therapeutische Breite dieser Substanz, wobei innerhalb pharmakologischer Dosierungen dennoch therapeutische Wirkungen vermittelt werden konnten. Anhand von in vitro Experimenten konnte eindeutig nachgewiesen werden, dass CpdA GR-unabhängig Apoptose induzierte, wobei Immunzellen und neuronale Zellen gegenüber CpdA besonders empfindlich reagierten. Der Einsatz T-Zell-spezifischer GR-defizienter Mäuse konnte zeigen, dass CpdA für die Vermittlung therapeutischer Wirkungen den cGR benötigt. Ferner wurde offensichtlich, dass CpdA in Abwesenheit des cGR in T-Zellen eine signifikante Verschlechterung der EAE verursachte. Durch die Anwendung physikochemischer Analysenmethoden, wie der Massenspektrometrie und 1H-NMR-Spektroskopie, konnte festgestellt werden, dass CpdA in vitro in gepufferten Medien in eine zyklische, chemisch sehr reaktive Verbindung (Aziridin) metabolisiert wird. Diese kann sehr wahrscheinlich für die Apoptose-Induktion in Zellen und die in Mäusen beobachteten neurotoxischen Ausfallerscheinungen verantwortlich gemacht werden. Durch chemische Analysen konnte in vitro in wässriger CpdA-Lösung ein weiterer Metabolit, das sympathomimetisch wirksame Synephrin, identifiziert werden. Um die Wirksamkeit adrenerger Substanzen in vivo zu testen, wurde das ß1/2-Sympathomimetikum Isoproterenol appliziert. Dieses verbesserte die EAE-Symptomatik, was sehr wahrscheinlich auf eine reduzierte Antigenpräsentation und einer damit verbundenen verminderten T-Zellinfiltration in das ZNS zurückzuführen ist.
Das zentrale Paradigma der Systembiologie zielt auf ein möglichst umfassendes Ver-ständnis der komplexen Zusammenhänge biologischer Systeme. Die in dieser Arbeit angewandten Methoden folgen diesem Grundsatz.
Am Beispiel von drei auf Basis von Datenbanken und aktueller Literatur rekonstruier-ten Netzwerkmodellen konnte in der hier vorliegenden Arbeit die Gültigkeit analyti-scher und prädiktiver Algorithmen nachgewiesen werden, die in Form der Analy-sesoftware Jimena angewandt wurden. Die daraus resultierenden Ergebnisse sowohl für die Berechnung von stabilen Systemzuständen, der dynamischen Simulation, als auch der Identifikation zentraler Kontrollknoten konnten experimentell validiert wer-den. Die Ergebnisse wurden in einem iterativen Prozess verwendet werden um das entsprechende Netzwerkmodell zu optimieren.
Beim Vergleich des Verhaltens des semiquantitativ ausgewerteten regulatorischen Netzwerks zur Kontrolle der Differenzierung humaner mesenchymaler Stammzellen in Chondrozyten (Knorpelbildung), Osteoblasten (Knochenbildung) und Adipozyten (Fett-zellbildung) konnten 12 wichtige Faktoren (darunter: RUNX2, OSX/SP7, SOX9, TP53) mit Hilfe der Berechnung der Bedeutung (Kontrollzentralität der Netzwerkknoten identifi-ziert werden). Der Abgleich des simulierten Verhaltens dieses Netzwerkes ergab eine Übereinstimmung mit experimentellen Daten von 47,2%, bei einem widersprüchlichen Verhalten von ca. 25%, dass unter anderem durch die temporäre Natur experimentel-ler Messungen im Vergleich zu den terminalen Bedingungen des Berechnung der stabilen Systemzustände erklärt werden kann.
Bei der Analyse des Netzwerkmodells der menschlichen Immunantwort auf eine Infek-tion durch A. fumigatus konnten vier Hauptregulatoren identifiziert werden (A. fumi-gatus, Blutplättchen, hier Platelets genannt, und TNF), die im Zusammenspiel mit wei-teren Faktoren mit hohen Zentralitätswerten (CCL5, IL1, IL6, Dectin-1, TLR2 und TLR4) fähig sind das gesamte Netzwerkverhalten zu beeinflussen. Es konnte gezeigt werden, dass sich das Aktivitätsverhalten von IL6 in Reaktion auf A. fumigatus und die regulato-rische Wirkung von Blutplättchen mit den entsprechenden experimentellen Resultaten deckt.
Die Simulation, sowie die Berechnung der stabilen Systemzustände der Immunantwort von A. thaliana auf eine Infektion durch Pseudomonas syringae konnte zeigen, dass die in silico Ergebnisse mit den experimentellen Ergebnissen übereinstimmen. Zusätzlich konnten mit Hilfe der Analyse der Zentralitätswerte des Netzwerkmodells fünf Master-regulatoren identifiziert werden: TGA Transkriptionsfaktor, Jasmonsäure, Ent-Kaurenoate-Oxidase, Ent-kaurene-Synthase und Aspartat-Semialdehyd-Dehydrogenase.
Während die ersteren beiden bereits lange als wichtige Regulatoren für die Gib-berellin-Synthese bekannt sind, ist die immunregulatorische Funktion von Aspartat-Semialdehyd-Dehydrogenase bisher weitgehend unbekannt.
1. Scorpions can orient menotactically to horizontal air currents (Fig. 1). 2. Changing the wind velocity from 0,05-0,1 m/sec to 3--5 m/sec has no influence on the menotactic angle kept by an anemomenotactic oriented scorpion (Fig. 2). 3. The receptors percieving the direction of air currents are the trichobothria. 4. Orientation to horizon landmarks, anemomenotactic and astromenotactic orientation does not exclude each other but complete themthelves mutually: a) A scorpion orienting to horizon landmarks learns the corresponding anemomenotactic and astromenotactic angle (Fig. 4). b) While orienting anemomenotactically (which is normally the main means of orientation when landmarks are absent) they continously learn new astromenotactical angles (Fig. 5), thus compensating for the movement of the moon or sun which can not be compensated otherwise. c) Short calms and short changes of wind direction can be overcome by astrotaxis.
1. Die Feistkäfer Pimelia grossa, P. tenuicornis, der Mehlkäfer Tenebrio molitor, die Mistkäfer Geotrupes silvaticus und G. stercorarius konnen sich unter entsprechenden Bedingungen rein anemomenotaktisch orientieren (Abb. 1-8). Sie bevorzugen Laufwinkel, die in relativ enge Winkelbereiche rechts und links der beiden Grundrichtungen führen (Abb. 3, 4, 26). 2. Die Bevorzugung bestimmter Winkelgrößen andert sich bei Geotrupes nicht gesetzmig mit der Tageszeit, der Temperatur (im Bereich 18-28° C) oder dem Fütterungszustand (Abb. 8-11). 3. Die untere Grenze der Windstärke, die eine menotaktische Einstellung ermöglicht, liegt für die Mistkäfer bei etwa 0,15 m/sec, für die Feistkäfer bei etwa 0,4 m/sec. Die obere Grenze befindet sich bei Geschwindigkeiten, die den Käfern ein Vorwärtskommen unmöglich machen. 4. Bei der menotaktischen Einstellung wird nur die Reizrichtung nicht aber die Reizstarke bewertet (Abb. 13-15). 5. Die Kontinuitat des Luftstroms ist keine Voraussetzung für die anemomenotaktische Orientierung: Die Käfer orientieren sich auch nach kurzen Windstößen (Abb. 17, 19, 21). Während der Windstille kommt es zu regelhaften Abweichungen von dem bei Wind eingehaltenen Kurs (Abb. 18). Das Ausmaß dieser Abweichungen wird nach häufigen Windunterbrechungen stark verringert (Abb. 20). 6. Gegen Turbulenzen des Luftstroms, wie sie über unebenem Untergrund entstehen, ist die Anemomenotaxis der Käfer nicht sehr anfällig (Abb. 22). 7. Die Sinnesorgane, die dem intakten Käfer die Windrichtungsbestimmung ermöglichen, sprechen auf Bewegungen im Pedicellus-Flagellumgelenk an. Ein Verlust der Endkolben hat beim Mistkäfer keinen Einfluß auf die Richtungs- und Winkelgrößenwahl, auch die Streuung wird nicht signifikant größer. 2 Flagellenglieder pro Antenne ermöglichen bei Windgeschwindigkeiten um oder über 1 m/sec noch eine anemomenotaktische Orientierung (Tabelle 3). 8. Bei 3 Mistkäfern, deren Fühler 4 Wochen bzw. 4 Monate vor dem Versuch entfernt worden waren, konnte wieder eine Orientierung nach der Windrichtung nachgewiesen werden (Abb. 23, Tabelle 1). 9. Die Kafer konnen Laufwinkel intramodal vierdeutig transponieren (z.B. Abb. 28, 29). Am deutlichsten tritt diese Fähigkeit bei Versuchsneulingen zutage, deren Laufe rein fluchtmotiviert sind: Sie wählen normalerweise denjenigen der 4 möglichen Laufwinkel, der der Aufsetzrichtung am nächsten liegt (vgl. Abb. 25, 26). 10. Die Existenz und die Wirkungsrichtung eines Drehkommandos, sowie die Beteiligung beider Grundorientierungen an der Anemomenotaxis werden nachgewiesen (Abb. 31). Die Fähigkeit, eine gleichbleibende Drehkommandogröße (die nie zu einer stärkeren Abweichung als 90° von einer Grundrichtung führen kann) mit verschiedenem Vorzeichen der Drehrichtung versehen zu konnen und die Möglichkeit zur Taxisumkehr (Abb. 32) erklären die orientierungsphysiologische Seite des vierdeutigen intramodalen Transponierens. 11. Versuchsergebnisse, die Aussagen uber den physiologischen Mechanismus der Anemomenotaxis der Käfer zulassen, sprechen für einen Kompensationsmechanismus. Die gegen die Kompensationstheorie der Menotaxis (JANDER, 1957) vorgebrachten Argumente werden im Rahmen der bisherigen Resultate kurz diskutiert. 12. Die möglichen biologischen Bedeutungen der Anemomenotaxis werden besprochen. Es wird angenommen, daß sie beim Appetenzverhalten des nach geruchlichen Schlüsselreizen "suchenden" Käfers ihre biologisch wichtigste Aufgabe erfüllt. Sie kann auch die basalen Aufgaben einer Raumorientierung übernehmen und so z.B. kompaßtreue Fluchtkurse steuern.
Das angeborene Immunsystem von Insekten besteht aus einer humoralen Komponente, einer zellulären Komponente und dem Prophenoloxidase-aktivierenden System. Fast alle Erkenntnisse über das angeborene Immunsystem stammen von Arbeiten mit Modellorganismen wie z.B. Drosophila oder Anopheles gambiae. Wie genau das Immunsystem der Honigbiene (Apis mellifera) funktioniert, ist jedoch noch relativ unbekannt. In der vorliegenden Arbeit wurden die unterschiedlichen Immunreaktionen aller drei Entwicklungsstadien der Honigbiene nach artifizieller Infektion mit Gram-negativen und Gram-positiven Bakterien (Escherichia coli und Micrococcus flavus) und dem Akuten Bienen Paralyse Virus (ABPV) untersucht und verglichen. Eine E. coli-Injektion zeigt bei Larven und adulten Arbeiterinnen nur wenig Auswirkung auf das äußere Erscheinungsbild und die Überlebensrate. In beiden Entwicklungsstadien wird die humorale Immunantwort stark induziert, erkennbar an der Expression der antimikrobiellen Peptide (AMPs) Hymenoptaecin, Defensin1 und Abaecin. Zusätzlich werden allein in Jungbienen nach bakterieller Infektion vier weitere immunspezifische Proteine exprimiert. Unter anderem eine Carboxylesterase (CE1) und das Immune-Responsive Protein 30 (IRp30). Die Expression von CE1 und IRp30 zeigt dabei den gleichen zeitlichen Verlauf wie die der AMPs. In Jungbienen kommt es zudem nach E. coli-Injektion zu einer raschen Abnahme an lebenden Bakterien in der Hämolymphe, was auf eine Aktivierung der zellulären Immunantwort schließen lässt. Ältere Bienen und Winterbienen zeigen eine stärkere Immunkompetenz als Jungbienen. Selbst nicht-infizierte Winterbienen exprimieren geringe Mengen der immunspezifischen Proteine IRp30 und CE1. Die Expression von IRp30 kann dabei durch Verwundung oder Injektion von E. coli noch gesteigert werden. Eine weitere Besonderheit ist die im Vergleich zu Jungbienen raschere Abnahme an lebenden Bakterien in der Hämolymphe bis hin zur vollständigen Eliminierung. Die Reaktion von Puppen auf eine bakterielle Infektion war völlig unerwartet. Nach Injektion von E. coli-Zellen kommt es innerhalb von 24 h p.i. zu einem tödlichen Kollaps, der sich in einer Graufärbung des gesamten Puppenkörpers äußert. Da keine Expression von AMPs nachzuweisen war, wird die humorale Immunantwort offensichtlich nicht induziert. Auch die zelluläre Immunantwort scheint nicht aktiviert zu werden, denn es konnte keine Abnahme an lebenden E. coli-Zellen beobachtet werden. Aufgrund dieser fehlenden Immunreaktionen vermehrt sich E. coli im Hämocoel infizierter Puppen und scheint damit deren Tod herbeizuführen. Nach viraler Infektion wurden in allen drei Entwicklungsstadien der Honigbiene gänzlich andere Reaktionen beobachtet als nach bakterieller Infektion. Bei dem verwendeten Akuten Bienen Paralyse Virus (ABPV) handelt es sich um ein Picorna-ähnliches Virus, dessen Vermehrung in der Hämolymphe über die massive Synthese der Capsidproteine verfolgt werden kann. Eine Injektion von sehr wenigen ABPV-Partikeln ins Hämocoel hat dramatische Auswirkungen auf Larven. Nach Virusinjektion kommt es innerhalb weniger Stunden zu einer raschen Virusvermehrung und schon 24 h p.i. zum Tod, häufig begleitet von einer Schwarzfärbung der gesamten Larve. Kurz vor dem Ableben kommt es neben dem Abbau hochmolekularer Speicherproteine zur Expression zahlreicher Proteine, die u.a. an der Translation oder dem Schutz vor oxidativem Stress beteiligt sind. Auf Jungbienen hat eine ABPV-Infektion keine so dramatischen Auswirkungen wie auf Larven. Sie zeigen lediglich Zeichen von Paralyse, zudem überleben sie länger bei höheren injizierten Partikelzahlen, die Virusvermehrung ist langsamer und es kommt zu keiner starken Veränderung des Hämolymph-Proteinmusters. Es konnte gezeigt werden, dass es in ABPV-infizierten Larven oder adulten Bienen zu keiner erkennbaren Aktivierung des humoralen Immunsystems in Form von exprimierten AMPs kommt. Zudem scheint die humorale Immunantwort auch nicht unterdrückt zu werden, denn nach gleichzeitiger Injektion von E. coli und ABPV kommt es neben der Expression viraler Capsidproteine auch zur Expression von AMPs. Zusätzlich konnte in Jungbienen nach Infektion mit ABPV eine zelluläre Immunantwort in Form von Nodulation ausgeschlossen werden. Ältere Bienen scheinen nicht nur mit bakteriellen Infektionen, sondern auch mit einer ABPV-Infektion besser zurechtzukommen. Bei einer Menge an ABPV-Partikeln, die in Jungbienen spätestens 72 h p.i. zum Tod führt, ist in Winterbienen eine Virusvermehrung erst ab 96 h p.i. erkennbar und diese beeinträchtigt die Überlebensrate kaum. Puppen sind einer Virusinfektion genauso schutzlos ausgeliefert wie einer Bakterieninfektion. Es kommt zwar zu keiner starken Änderung des äußeren Erscheinungsbildes, jedoch bleiben Puppen in ihrer Entwicklung komplett stehen. Das Virus muss sich daher stark vermehren, allerdings nicht überwiegend - wie bei Larven und adulten Bienen - in der Hämolymphe.
Millionen Menschen weltweit leiden an den verschiedensten Autoimmunerkrankungen. Diese Krankheiten entstehen, wenn das Immunsystem gesundes körpereigenes Gewebe angreift und zerstört. An der Pathogenese sind sowohl Komponenten des angeborenen Immunsystems als auch Bestandteile des adaptiven Immunsystems, wie Lymphozyten und Antikörper, beteiligt. Da die Ursachen und molekularen Mechanismen der Pathogenese dieser Erkrankungen bis heute weitgehend unbekannt sind, wurden in dieser Arbeit autoaggressive Lymphozyten bei den humanen Autoimmunerkrankungen Polymyositis und Multiple Sklerose näher untersucht. Die Polymyositis ist eine chronisch entzündliche Erkrankung der Skelettmuskulatur. Die Muskelfasern werden dabei von zytotoxischen CD8+ gd-T-Lymphozyten infiltriert, attackiert und schließlich zerstört. In einem seltenen Fall der Polymyositis wurden die Muskelzellen hingegen in ähnlicher Weise von CD8- gd-T-Lymphozyten angegriffen. Die gd-T-Lymphozyten waren monoklonal expandiert und ihr Rezeptor, im Folgenden als M88 bezeichnet, wurde als Vg1.3+Vd2+ identifiziert. Frühere Untersuchungen der Antigenspezifität dieser Zellen zeigten, dass M88 mehrere funktionell und strukturell verschiedene Proteine aus unterschiedlichen Spezies erkennt. Die Bindung erfolgt spezifisch durch die Antigenerkennungsregionen beider Rezeptorketten von M88. In dieser Arbeit wurden verschiedene bakterielle und humane Proteine des Translationsapparates als Antigene von M88 identifiziert. Weitere ausführliche Untersuchungen eines paradigmatischen bakteriellen Antigens, dem Translationsinitiationsfaktor EcIF1, zeigten, dass M88 an Oberflächen-exponierte Konformationsepitope von Proteinen bindet. Interessanterweise erkennt M88 mehrere humane Aminoacyl-tRNA-Synthetasen, Antigene, die in anderen Formen der Myositis von Autoantikörpern angegriffen werden. Diese Beobachtung ergibt eine bemerkenswerte Verbindung zwischen T-Zell- und Antikörper-vermittelten B-Zell-Antworten bei der autoimmunen Myositis. Bei der Multiplen Sklerose ist das zentrale Nervensystem betroffen. Autoaggressive Lymphozyten greifen die Myelinschicht der Nervenzellen im Gehirn und Rückenmark an und zerstören sie. Im Liquor cerebrospinalis von Patienten lassen sich klonal expandierte und affinitätsgereifte B-Zellen sowie „oligoklonale Banden“ (OKB) Antikörper nachweisen. Obwohl diese Merkmale auf eine Antigen-induzierte Immunantwort hindeuten, sind die zugrundeliegenden Antigene und die Rolle der OKB bei der Pathogenese bis heute unbekannt. In dieser Arbeit wurde die Antigenspezifität von fünf IgG OKB-Antikörpern aus drei Patienten untersucht. Durch verschiedene proteinbiochemische Methoden konnten intrazelluläre Kandidatenantigene identifiziert werden. Interessanterweise sind darunter mehrere nukleäre Proteine, die an der Transkriptionsregulation oder der RNA-Prozessierung beteiligt sind. Reaktivitäten gegen intrazelluläre Antigene treten auch bei anderen Autoimmunerkrankungen, wie beispielsweise dem systemischen Lupus erythematodes, auf. Diese Ergebnisse könnten auf einen allgemeinen Mechanismus der Entstehung und Funktion von Autoantikörpern bei diesen humanen Autoimmunerkrankungen hindeuten.
Die Meiose ist eine besondere Art der Zellteilung, die während der Keimzellreifung stattfindet. Sie umfasst zwei aufeinander folgende Zellteilungen mit nur einer DNA-Repli-kationsrunde, wodurch aus einer diploiden Ausgangszelle vier haploide Gameten entstehen. In der ersten meiotischen Teilung werden die homologen Chromosomen miteinander rekombiniert und voneinander getrennt, in der Meiose II findet die Trennung der Schwesterchromatiden statt. Für den korrekten Ablauf dieser Prozesse musste sich eine spezielle molekulare Architektur des meiotischen Chromosoms entwickeln welche die Synapse der homologen Chromosomen durch den Synaptonemalkomplex (SC) beinhaltet. SCs sind evolutionär hochkonservierte, meiosespezifische Proteinkomplexe, die eine zentrale Bedeutung für Synapse, Rekombination und Segregation der homologen Chromosomen haben. Ein SC besteht aus zwei lateralen Elementen (LEs), die den Achsen der homologen Chromosomen aufgelagert sind, einer zentralen Region (CR) und einem zentralen Element (CE). Eine Hauptstrukturkomponente der LEs in Vertebraten ist das Synaptonemalkomplexprotein, SYCP3. Um die molekulare Architektur des SC besser zu verstehen und die Bedeutung von SYCP3 für die Zusammenlagerung der LE aufzudecken, wurden die Polymerisationseigenschaften von SYCP3, exprimiert in somatischen Zellen, erforscht. In diesem experimentellen Ansatz polymerisierte SYCP3 autonom zu stabilen, höher geordneten, filamentösen Strukturen. Die „Coiled-Coil“-Domäne und die flankierenden, evolutionär konservierten Motive sind dabei notwenig, und nach Deletion des weniger konservierten N-terminalen Bereichs auch ausreichend für die Bildung der höher geordneten Strukturen. Der N-Terminus hingegen spielt eine Rolle in der Stabilität der Polymärstrukturen, welche durch Phosphorylierung zweier Serinreste im N-terminalen Bereich beeinflusst werden könnte. Obwohl die Struktur des SC in der Evolution hochkonserviert ist, sind die Protein-komponenten auf Aminosäuresequenzebene sehr unterschiedlich und weisen wenn überhaupt eine strukturelle Homologie in ihrer Domänenorganisation auf. Um den SC-Aufbau und dessen Funktion besser verstehen zu können, wurden die orthologen SC-Proteine zwischen taxonomisch entfernten Spezies Ratte und Medaka verglichen. Es konnte gezeigt werden, dass trotz der Unterschiede in den Aminosäuresequenzen die sich in den letzen 450 Millionen Jahren zwischen Fisch- und Säugern-SYCP3 akkumuliert haben, die Eigenschaften der Proteine vergleichbar sind, und das sie unter experimentellen Bedingungen miteinander interagieren und zu höher geordneten Strukturen kopolymerisieren können.
Aufklärung der molekularen Struktur und Funktion des R-Typ Anionenkanals QUAC1 in Schließzellen
(2016)
Zum Gasaustausch mit Ihrer Umgebung besitzen höhere Pflanzen stomatäre Komplexe. Die Turgor-getrieben Atmungsöffnungen in der Epidermis der Blätter werden von zwei Schließzellen umsäumt. Um bei Trockenheit einen exzessiven Verlust von Wasser zu verhindern, synthetisieren/importieren Schließzellen das Stresshormon ABA (Abszisinsäure), das über eine schnelle ABA-Signalkaskade plasmamembrangebundene Ionenkanäle steuert. Dabei wird der Stomaschluss durch die Aktivität von R-(rapid) und S-(slow)Typ Anionenkanälen initiiert. Obwohl die R- und S-Typ Anionenströme in Schließzellen seit Jahrzehnten bekannt waren, konnte erst kürzlich das Gen identifiziert werden, das für den S-Typ Anionenkanal (SLAC1, Slow activating Anion Channel 1) kodiert. Daraufhin wurde schnell der Zusammenhang zwischen dem Stresshormon ABA, der ABA-Signalkette und der Aktivität des SLAC1 Anionenkanals im heterologen Expressionssystem der X. laevis Oozyten als auch in Schließzellprotoplasten aufgeklärt. Es konnte gezeigt werden, dass ABA durch einen zytosolischen Rezeptor/Phosphatasekomplex (RCAR1/ABI1) erkannt wird und die Aktivität von kalziumabhängigen Kinasen (CPK-Familie) sowie kalziumunabhängigen Kinasen der SnRK2-Familie (OST1) steuert. In Anwesenheit von ABA phosphorylieren diese Kinasen SLAC1 und sorgen so für die Aktivierung von Anionenströmen und damit für die Initiierung des Stomaschlusses.
Die genetische Herkunft der ABA-induzierten R-Typ Ströme in Schließzellen war zu Beginn der vorliegenden Arbeit noch nicht bekannt. R-Typ Ströme zeichnen sich durch eine strikte Spannungsabhängigkeit und sehr schnellen Aktivierungs- sowie Deaktivierungskinetiken aus. Die Charakterisierung von Verlustmutanten des Schließzell-exprimierten Gens ALMT12 (Aluminium-aktivierter Malattransporter 12) konnte in Zusammenarbeit mit der Arbeitsgruppe Martinoia (Zürich) erste Hinweise auf die Beteiligung dieses Gens an der Stomabewegung demonstrieren. Anschließende Patch-Clamp Untersuchungen an Schließzellprotoplasten aus Wildtyppflanzen und ALMT12-Verlustmutanten zeigten, dass ALMT12 für die Malat-aktivierte R-Typ Anionenstromkomponente verantwortlich ist. Deshalb wurde der Anionenkanal QUAC1 (Quickly activating Anion Channel 1) benannt - in Anlehnung an die Benennung des Anionenkanals SLAC1. Mit der Identifizierung von QUAC1 in planta war es nun meine Aufgabe, die elektrischen Eigenschaften von ALMT12/QUAC1 und dessen Aktivitätskontrolle durch die ABA-Signalkaskade im heterologen Expressionssystem der Xenopus Oozyten zu untersuchen.
Protein-Protein Interaktionsstudien mit der Hilfe der Bimolekularen Fluoreszenz-Technik, sowie die Beobachtung von markant erhöhten QUAC1 Anionenströmen in Anwesenheit der SnRK2 Kinase OST1 und den Calcium-abhängigen Kinasen CPK2 und CPK20, ließen den Schluss zu, dass QUAC1, ebenso wie SLAC1, unter der Kontrolle des schnellen ABA-Signalwegs steht. Eine zusätzliche Expression des negativen Regulators ABI1 unterdrückte die aktivierenden Eigenschaften der QUAC1-aktivierenden Kinasen, was die Hypothese der Koregulation von S- und R-Typ Anionenkanälen durch die gleiche ABA-Signalkaskade weiter unterstützt.
Zur weiteren Aufklärung der elektrischen Eigenschaften von QUAC1 wurden tiefgreifende elektrophysiologische Untersuchungen mit der Zwei-Elektroden-Spannungsklemmen Technik durchgeführt. Durch die Wahl von geschickten Spannungsprotokollen konnte sowohl die schnelle Aktivierungskinetik als auch die schnelle Deaktivierungskinetik von QUAC1 bestimmt und quantifiziert werden. Diese Stromantworten waren sehr ähnlich zu den R-Typ Strömen, die man von Patch-Clamp Untersuchungen an Schließzellprotoplasten kannte, was ein weiteres Indiz dafür war, dass es sich bei QUAC1 tatsächlich um eine Komponente des R-Typ Kanals aus Schließzellen handelt. Weiterführende Untersuchungen bezüglich der Spannungsabhängigkeit und der Selektivität von QUAC1 charakterisierten das Protein als einen Depolarisations-aktivierten Anionenkanal mit einer starken Präferenz für Dicarbonsäuren wie Malat und Fumarat. Zudem konnte auch eine Leitfähigkeit für Sulfat und Chlorid nachgewiesen werden. Interessanterweise erwies sich Malat nicht nur als ein permeierendes Ion, sondern auch als ein regulierendes Ion, welches das spannungsabhängige Schalten von QUAC1 maßgeblich beeinflusst. Extrazelluläres Malat verschob die Offenwahrscheinlichkeit von QUAC1 sehr stark zu negativeren Membranspannungen, so dass der Anionenkanal bereits bei typischen Ruhespannungen von Schließzellen (ca. -150 mV) aktiviert werden konnte. Eine Beladung von QUAC1-exprimierender Oozyten mit Malat bewirkte zum einen höhere Anioneneffluxströme, aber auch eine Verschiebung der spannungsabhängigen Offenwahrscheinlichkeit zu negativeren Membranpotentialen.
Struktur-Funktionsanalysen sollten die umstrittene Topologie von ALMT-ähnlichen Proteinen beleuchten und die molekulare Herkunft der Phosphorylierungsaktivierung aufzeigen, sowie die Malatabhängigkeit und die starke Spannungsabhängigkeit von QUAC1 aufklären. Es zeigte sich jedoch schnell, dass Punktmutationen und Deletionen im C-Terminus von QUAC1 sehr häufig zu nicht-funktionellen Mutanten führten. Diese Tatsache weist darauf hin, dass es sich um einen hoch-strukturierten und funktionell sehr wichtigen Bereich des Anionenkanals handelt. Auch die Topologie des Anionenkanalproteins wird in der Literatur kontrovers diskutiert. Sowohl die Lage des N- und C-Terminus (extrazellulär oder intrazellulär), als auch die Anzahl der membrandurchspannenden Domänen war nicht abschließend geklärt. Deshalb wurde in einem Fluoreszenz-basiertem Ansatz die Lage der Termini bestimmt. Im Rahmen meiner Arbeit konnte somit eindeutig gezeigt werden, dass sich beide Termini im Zytosol der Zelle befinden. Auf Grundlage von Modellen aus der Literatur und meiner Topologiebestimmungen konnte schließlich ein erweitertes Modell zur Struktur von QUAC1 entwickelt werden. Dieses Modell kann in Zukunft als Ausgangspunkt für weiterführende Struktur-Funktionsanalysen dienen.
Diese Arbeit hat somit gezeigt, dass das Gen QUAC1 tatsächlich eine Komponente der R-Typ Ströme in Schließzellen kodiert. Ebenso wie SLAC1 steht der Malat-induzierte Anionenkanal QUAC1 unter der Kontrolle der schnellen ABA-Signalkaskade. In Zukunft bleibt zu klären, welche weiteren Gene für die R-Typ Kanalproteine in Schließzellen kodieren und welche strukturelle Grundlage für die besonderen Eigenschaften von QUAC1 hinsichtlich seiner schnellen Kinetiken, seiner Selektivität und Aktivierbarkeit durch Malat.
Aufklärung der Struktur und Charakterisierung des ternären Komplexes aus BMP-2, BMPR-IA und ActR-IIB
(2006)
„Bone Morphogenetic Proteins“ (BMPs) kontrollieren eine Vielzahl unterschiedlichster Prozesse bei der Embryonalentwicklung und der postnatalen Gewebehomöostase. Wie TGF-betas, Activine und andere Mitglieder der TGF-beta Superfamilie vermitteln BMPs ihr Signal durch die Bildung eines aus dem Liganden und zwei Rezeptorsubtypen bestehenden Signalkomplexes. Für die Rezeptoraktivierung ist ein Zwei-Schritt Mechanismus allgemein akzeptiert. Bisher wurde nur der erste Schritt, die Bindung des Liganden an seinen hochaffinen Rezeptor, strukturell untersucht. Der molekulare Mechanismus der anschließenden Rekrutierung des niederaffinen Rezeptortyps war bisher nicht bekannt. Die vorliegende Arbeit beschreibt die Präparation, Kristallisation und Strukturaufklärung des ternären Komplexes aus BMP-2 und den extrazellulären Domänen von BMPR-IA und ActR-IIB. Mit der Kristallstruktur dieses ternären Komplexes kann erstmals der Mechanismus der BMP Rezeptoraktivierung von der Bindung des Liganden bis hin zur Transaktivierung untersucht werden. Der Ligand BMP-2 präsentiert sich hier, im Gegensatz zu anderen Mitgliedern der TGF-beta Superfamilie, als nahezu starre Komponente, um welche die beiden Rezeptortypen symmetrisch angelagert werden. Zwischen den extrazellulären Domänen der Rezeptoren können keine direkten Kontakte beobachtet werden. Die in Zellen beobachtete Kooperativität bei der Rekrutierung des niederaffinen Rezeptors im BMP-2 System ist folglich weder durch allosterische Effekte, noch durch direkte Rezeptor-Rezeptor-Kontakte erklärbar. Vielmehr repräsentiert die Bindung des niederaffinen Rezeptors von BMP-2 einen Minimalmechanismus, bei dem Kooperativität über die Verringerung der Freiheitsgrade durch Lokalisation des Liganden in der Zellmembran erzeugt wird. Die durchgeführten Mutations-/Interaktionsanalysen erlauben vertiefende Einblicke wie Affinität und Spezifität im BMP/Activin-System generiert werden. Es zeigt sich, dass sowohl bei der niederaffinen Interaktion von ActR-IIBecd mit BMP-2 bzw. BMP-7 als auch bei der hochaffinen Bindung von ActA mit ActR-IIBecd ein Großteil der freien Bindungsenergie von denselben hydrophoben Interaktionen getragen wird. Während polare Interaktionen bei der niederaffinen Bindung der BMPs an ActR-IIBecd kaum eine Rolle spielen, stellt die zentrale Wasserstoffbrücke zwischen ActA Ser90(OG) und ActR-IIB Leu61(N) bei der Bildung des Komplexes ActA/ActR-IIBecd eine entscheidende Determinante der hochaffinen Bindung dar. BMP-2 bindet an die Typ II Rezeptoren BMPR-II, ActR-II und ActR-IIB mit nahezu identischer Affinität, daher wird eine promiske Verwendung dieser Rezeptoren angenommen. In dieser Arbeit konnte gezeigt werden, dass die spezifische Erkennung und Bindung der Typ II Rezeptoren durch den Austausch einzelner Aminosäuren modulierbar ist. Mit den hier gewonnenen Kenntnissen über den molekularen Mechanismus der Typ II Rezeptorerkennung ist nun eine Generierung von BMPs mit definierter Typ II Rezeptorspezifität möglich. Diese BMP-2 Varianten können als Werkzeuge zur Aufklärung von Typ II Rezeptor-spezifischen Signalwegen verwendet werden. Ebenso wäre es denkbar, BMP-2 Varianten mit ausgeprägter Typ II Rezeptor Spezifität in vivo zur Modulation TypII Rezeptor spezifischer Signalwege zu benutzen. Beispielsweise könnte ein auf BMP-2 basierendes ActR-IIB-spezifisches Protein als Myostatin-Antagonist zur Behandlung von Muskeldystrophie eingesetzt werden.
Das hohe invasive Potential und die starke Resistenz gegen Radio-/Chemotherapie von Glioblastoma multiforme (GBM) Zellen machen sie zu dem tödlichsten Tumor ihrer Art. Es ist deshalb von großem Interesse die Grundlagen, welche der Migrationsfähigkeit und DNA Reparatur zu Grunde liegen, besser zu verstehen.
Im ersten Teil dieser Arbeit wurden zwei Algorithmen zur automatischen Analyse der Migration in der Einzelzellverfolgung und im Wundheilungsassay modifiziert. Die Auswertung der Daten konnte automatisch und somit schnell, effektiv und mit geringerem Arbeitsaufwand durchgeführt werden. Mit Hilfe dieser automatischen Algorithmen wurde die Migrationsfähigkeit von zwei GBM-Zelllinien (DK-MG und SNB19) untersucht. Zusätzlich wurde die konfokale Laserscanning- sowie die hochauflösende dSTORM-Fluoreszenzmikroskopie verwendet um die, der Zellbewegung zu Grunde liegende, Struktur des F Aktin und der fokalen Adhäsionskinase (FAK) aufzulösen und darzustellen. Unter Anwendung dieser genannten Methoden sind die Effekte des dualen PI3K/mTOR Inhibitors PI-103 alleine und in Kombination mit dem Hsp90 Inhibitor NVP AUY922 mit und ohne Bestrahlung auf die Bewegung untersucht worden. Es konnte festgestellt werden, dass sich beide Zelllinien deutlich in ihrem migratorischem Potential in vitro unterscheiden und zudem auch markante Unterschiede in ihrer Morphologie aufweisen. Die weniger invasiven DK MG-Zellen besitzen eine polarisierte Zellstruktur, wohingegen SNB19-Zellen sich durch multipolare ungerichtete Bewegung auszeichneten. Zudem wurde die Migration, durch PI3K/mTOR Inhibition mit PI-103 bei den DK-MG-Zellen (p53 wt, PTEN wt), sehr effektiv unterdrückt. Wohingegen sich die SNB19-Zellen (p53 mut, PTEN mut) resistent gegen diesen Inhibitor zeigten. Hsp90 Inhibition offenbarte in beiden Zelllinien einen starken inhibitorischen Effekt auf die Migration der Zellen sowie die Reorganisierung des F Aktinskelettes.
In der zweiten Hälfte dieser Arbeit wurde ein Augenmerk auf die DNA-DSB-Reparatur der GBM Zellen nach ionisierender Strahlung gelegt. Zunächst wurde eine automatische Analysesoftware „FocAn-3D“ entwickelt, mit dessen Hilfe die DNA Doppelstrangbruchreparaturkinetik untersucht werden sollte. Diese Software ermöglicht es die gesamten Zellkerne mit ihren γH2AX-Foci in 3D-cLSM-Aufnahmen zu untersuchen. Es konnte somit eine Verbesserung der Genauigkeit in der Auszählung der γH2AX-Foci erreicht werden, welche 2D beschränkter Software verwehrt bleibt. Mit FocAn-3D konnte der gesamte Verlauf der Induktions- und Abbauphase der γH2AX-Foci in DK MG- und SNB19-Zellen mit einem mathematischen Modell ausgewertet und dargestellt werden. Des Weiteren wurde die Nanometerstruktur von γH2AX- und pDNA-PKcs-Foci mittels hochauflösender dSTORM-Mikroskopie untersucht. Konventionelle Mikroskopiemethoden, begrenzt durch das Beugungslimit und einer Auflösung von ~200 nm, konnten die Nanometerstruktur (<100 nm) der Reparaturfoci bisher nicht darstellen. Mit Hilfe der beugungsunbegrenzten dSTORM-Mikroskopie war es möglich in DK MG- und SNB19-Zellen die Nanometerstruktur genannten Reparaturproteine in den Foci mit einer Auflösung von bis zu ~20 nm darzustellen. γH2AX-Foci zeigten sich als eine Verteilung aus einzelnen Untereinheiten („Nanofoci“) mit einem Durchmesser von ~45 nm. Dies lässt die Vermutung zu, dass es sich hier um die elementare Substruktur der Foci und somit der γH2AX enthaltenen Nukleosome handelt. DNA-PK-Foci wiesen hingegen eine diffusere Verteilung auf.
Die in dieser Arbeit ermittelten Unterschiede im Migrationsverhalten der Zellen rechtfertigen eine weitere präklinische Untersuchung der verwendeten Inhibitoren als potentielle Zelltherapeutika für die Behandlung von GBM. Zudem konnte sich dSTORM als machtvolles Hilfsmittel, sowohl zur Analyse der Migration zugrundeliegenden Zytoskelettstruktur und der Effekte der Hsp90 Inhibierung, als auch, der Nanostruktur der DNA-DSB-Reparaturfoci herausstellen. Es ist anzunehmen, dass beugungsunbegrenzte Mikroskopiemethoden sich als bedeutende Werkzeuge in der medizinischen und biologischen Erforschung der DNA-Reparaturmechanismen herausstellen werden. Das in dieser Arbeit entwickelte ImageJ Plugin „FocAn-3D“ bewies sich ebenfalls als ein vielversprechendes Werkzeug für die Analyse der Reparaturkinetik. Mit Hilfe von „FocAn-3D“ sollte es somit möglich sein u.a. den Einfluss gezielter Inhibition auf den zeitlichen Verlauf der Induktion und des Abbaus der DNA-Reparaturmaschinerie genauer zu studieren.
Zentrales Ziel dieser Arbeit war es, Methoden der Mikroskopie, Bildverarbeitung und Bilderkennung für die Charakterisierungen verschiedener Phyotplankter zu nutzen, um deren Analyse zu verbessern und zu vereinfachen.
Der erste Schwerpunkt der Arbeit lag auf der Analyse von Phytoplanktongemeinschaften, die im Rahmen der Überprüfung der Süßwasserqualität als Marker dienen. Die konventionelle Analyse ist dabei sehr aufwendig, da diese noch immer vollständig von Hand durchgeführt wird und hierfür speziell ausgebildetes Personal eingesetzt werden muss. Ziel war es, ein System zur automatischen Erkennung aufzubauen, um die Analyse vereinfachen zu können. Mit Hilfe von automatischer Mikroskopie war es möglich Plankter unterschiedlicher Ausdehnung durch die Integration mehrerer Schärfeebenen besser in einem Bild aufzunehmen. Weiterhin wurden verschiedene Fluoreszenzeigenschaften in die Analyse integriert. Mit einem für ImageJ erstellten Plugin können Organismen vom Hintergrund der Aufnahmen abgetrennt und eine Vielzahl von Merkmalen berechnet werden. Über das Training von neuralen Netzen wird die Unterscheidung von verschieden Gruppen von Planktontaxa möglich. Zudem können weitere Taxa einfach in die Analyse integriert und die Erkennung erweitert werden. Die erste Analyse von Mischproben, bestehend aus 10 verschiedenen Taxa, zeigte dabei eine durchschnittliche Erkennungsrate von 94.7% und eine durchschnittliche Falsch-Positiv Rate von 5.5%. Im Vergleich mit bestehenden Systemen konnte die Erkennungsrate verbessert und die Falsch Positiv Rate deutlich gesenkt werde. Bei einer Erweiterung des Datensatzes auf 22 Taxa wurde darauf geachtet, Arten zu verwenden, die verschiedene Stadien in ihrem Wachstum durchlaufen oder höhere Ähnlichkeiten zu den bereits vorhandenen Arten aufweisen, um evtl. Schwachstellen des Systemes erkennen zu können. Hier ergab sich eine gute Erkennungsrate (86.8%), bei der der Ausschluss von nicht-planktonischen Partikeln (11.9%) weiterhin verbessert war. Der Vergleich mit weiteren Klassifikationsverfahren zeigte, dass neuronale Netze anderen Verfahren bei dieser Problemstellung überlegen sind. Ähnlich gute Klassifikationsraten konnten durch Support Vektor Maschinen erzielt werden. Allerdings waren diese bei der Unterscheidung von unbekannten Partikeln dem neuralen Netz deutlich unterlegen.
Der zweite Abschnitt stellt die Entwicklung einer einfachen Methode zur Viabilitätsanalyse von Cyanobakterien, bei der keine weitere Behandlung der Proben notwendig ist, dar. Dabei wird die rote Chlorophyll - Autofluoreszenz als Marker für lebende Zellen und eine grüne unspezifische Fluoreszenz als Marker für tote Zellen genutzt. Der Assay wurde mit dem Modellorganismus Synechocystis sp. PCC 6803 etabliert und validiert. Die Auswahl eines geeigeneten Filtersets ermöglicht es beide Signale gleichzeitig anzuregen und zu beobachten und somit direkt zwischen lebendenden und toten Zellen zu unterscheiden. Die Ergebnisse zur Etablierung des Assays konnten durch Ausplattieren, Chlorophyllbestimmung und Bestimmung des Absorbtionsspektrums bestätigt werden. Durch den Einsatz von automatisierter Mikroskopie und einem neu erstellten ImageJ Plugin wurde eine sehr genaue und schnelle Analyse der Proben möglich. Der Einsatz beim Monitoring einer mutagenisierten Kultur zur Erhöhung der Temperaturtoleranz ermöglichte genaue und zeitnahe Einblicke in den Zustand der Kultur. Weitere Ergebnisse weisen darauf hin, dass die Kombination mit Absorptionsspektren es ermöglichen können bessere Einblicke in die Vitalität der Kultur zu erhalten.
Bedeutung der NO-sensitiven Guanylyl Cyclase bei der Angiogenese und der Arteriogenese in der Maus
(2014)
Stickstoffmonoxid (NO) spielt eine wichtige Rolle bei Gefäßremodelling-Prozessen wie Angiogenese und Arteriogenese. Die NO-Synthese im Gefäßsystem wird hauptsächlich durch die endotheliale NO-Synthase (eNOS) gewährleistet. Sie kann durch verschiedene Faktoren wie Scherkräfte und Zytokine wie der vaskuläre endotheliale Wachstumsfaktor (VEGF) reguliert werden. VEGF ist ein wichtiger Stimulator der Angiogenese und wird während dieses Prozesses hochreguliert. Die meisten physiologischen Effekte von NO werden durch die NO-sensitive Guanylyl-Cyclase (NO-GC) vermittelt. Als Hauptrezeptor für NO produziert die NO-GC den sekundären Botenstoff cyklisches Guanosinmonophosphat (cGMP) und führt dadurch zur Stimulation der verschiedenen Effektoren wie z.B. der PKG. Ob die Wirkung von NO in Angiogenese und Arteriogenese ebenfalls durch NO-GC vermittelt wird, war bis zum Beginn dieser Arbeit noch unklar.
Die NO-GC besteht aus zwei Untereinheiten (α und ß). Die Deletion der ß1-Untereinheit in Mäusen resultiert in einer vollständigen Knockout Maus (GCKO). Mithilfe des Cre-LoxP-Systems wurden zusätzlich zellspezifische Knockout-Mäuse für glatte Muskelzellen (SMC-GCKO) und Endothelzellen (EC-GCKO) generiert. Um die Rolle der NO-GC in der Angiogenese und Arteriogenese zu untersuchen, wurden drei gut etablierte Methoden benutzt.
Im ersten Teil des Projekts sollte die Expression der NO-GC in Endothelzellen untersucht werden. Zu diesem Zweck wurde die reverse Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR) benutzt. Die Ergebnisse zeigen, dass die NO-GC in Endothelzellen der Lunge nur äußerst gering wenig exprimiert ist. Durch den Aortenring-Assay wurde eine Rolle der NO-GC bei der VEGF-vermittelten Angiogenese festgestellt. Dabei zeigte sich eine stärkere Angiogeneserate bei globaler Abwesenheit der NO-GC. Bei Fehlen der NO-GC ausschließlich in Endothelzellen zeigte sich kein Unterschied in den aussprossenden Aorten im Vergleich zu den Kontroll-Tieren. Dies zeigt, dass die NO-GC in Endothelzellen sehr wahrscheinlich keine Rolle bei der VEGF-vermittelten Angiogenese spielt.
Im zweiten Teil wurde die Rolle der NO-GC bei der Angiogenese in einem in vivo-Modell untersucht. In dem Modell der Sauerstoff-induzierten-Retinopathie zeigten die GCKO-Mäuse eine verringerte Vaso-Obliteration, eine verlangsamte Angiogenese und eine erhöhte Tuft-Bildung. Ähnliche Ergebnisse wurden bei den SMC-GCKO-Tieren beobachtet. EC-GCKO-Mäuse zeigten eine gegenüber den Kontroll-Tieren unveränderte Vaso-Obliteration, Angiogeneserate und Tuft-Bildung. Diese Ergebnisse lassen darauf schließen, dass die NO-GC in Endothelzellen keine Rolle spielt. Immunfluoreszenz-Aufnahmen zeigten die Expression von NO-GC in Perizyten der Gefäßkapillaren der Mausretina. Daher könnte die NO-GC in diesem Zelltyp letztendlich für die Effekte bei den GCKO- und SMC-GCKO-Tieren verantwortlich sein.
Im letzten Teil dieser Arbeit wurde eine Versuchsreihe unter Anwendung des Hinterlauf-Ischämie-Modells durchgeführt. Hierbei entwickelten die Pfoten aller GCKO- und teilweise der SMC-GCKO-Tiere nach der Ligation der Femoralarterie eine Nekrose. Die Regeneration der Hinterläufe der EC-GCKO-Tiere nach der Operation verlief normal. Diese Ergebnisse schließen eine bedeutende Rolle der NO-GC in Endothelzellen aus, zeigen allerdings, dass die NO-GC in den glatten Muskelzellen essentiell für den Arteriogenese-Prozess ist.
Zusammengefasst führt die Deletion der NO-GC in glatten Muskelzellen und wahrscheinlich auch in Perizyten zur einer verlangsamten Angiogenese und Inhibierung der Arteriogenese.